兔熱休克蛋白27hsp-27試劑盒elisa

1、Address:KenhG.Howell748NickelRoadSanFrancisco(415)CA94104Telephone:0014159141567兔熱休克蛋白兔熱休克蛋白2727（HSP27HSP27）試劑盒試劑盒（ELISAELISA）使用說明書?本試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織、細胞上清及相關(guān)液體本試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織、細胞上清及相關(guān)液體樣本中兔熱休克蛋白樣本中兔熱休克蛋白2727（HSP27

2、HSP27）的含量。）的含量。?有效期：有效期：6個月個月?保存條件：保存條件：28℃28℃?本試劑盒僅供體外研究使用，不用于臨床診斷本試劑盒僅供體外研究使用，不用于臨床診斷實驗原理實驗原理試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。往預(yù)先包被兔熱休克蛋白27（HSP27）捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作

3、用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的兔熱休克蛋白27（HSP27）呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），計算樣品濃度。樣本處理及要求樣本處理及要求1.血清血清：全血標本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000g離心20分鐘，取上清即可檢測，或?qū)吮痉庞?0℃或80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。2.血漿血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標本采集后30分鐘內(nèi)于28C1000g離心20分鐘，或?qū)吮痉庞?0℃或80℃保

4、存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。3.組織勻漿組織勻漿：用預(yù)冷的PBS(0.01MpH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結(jié)果），稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應(yīng)體積的PBS（一般按1:9的重量體積比，比如1g的組織樣品對應(yīng)9mL的PBS，具體體積可根據(jù)實驗需要適當(dāng)調(diào)整，并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞，可以對勻漿液進行超聲破碎，或反復(fù)凍融。最后將勻漿

5、液于5000g離心5~10分鐘，取上清檢測。4.細胞培養(yǎng)物上清或其它生物標本細胞培養(yǎng)物上清或其它生物標本：1000g離心20分鐘，取上清即可檢測，或?qū)吮痉庞?0℃或80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。注：標本溶血會影響最后檢測結(jié)果，因此溶血標本不宜進行此項檢測。Address:KenhG.Howell748NickelRoadSanFrancisco(415)CA94104Telephone:0014159141567注意事項注意事項1.嚴

6、格按照規(guī)定的時間和溫度進行溫育以保證準確結(jié)果。所有試劑都必須在使用前達到室溫2025℃。使用后立即冷藏保存試劑。2.洗板不正確可以導(dǎo)致不準確的結(jié)果。在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體。溫育過程中不要讓微孔干燥掉。3.消除板底殘留的液體和手指印，否則影響OD值。4.底物顯色液應(yīng)呈無色或很淺的顏色，已經(jīng)變藍的底物液不能使用。5.避免試劑和標本的交叉污染以免造成錯誤結(jié)果。6.在儲存和溫育時避免強光直接照射。7.平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝

7、聚在冷板條上。8.任何反應(yīng)試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強烈氣體。任何漂白成分都會破壞試劑盒中反應(yīng)試劑的生物活性。9.不能使用過期產(chǎn)品。10.如果可能傳播疾病，所有的樣品都應(yīng)管理好，按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測裝置。試劑準備試劑準備試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡后方可使用。20洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份20洗滌緩沖液加19份蒸餾水。操作步驟操作步驟1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條

8、用自封袋密封放回4℃。2.設(shè)置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；3.樣本孔中加入待測樣本50μL；空白孔不加。4.除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機洗板）。6.每孔加入底物A、B各

9、50μL，37℃避光孵育15min。7.每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值。實驗結(jié)果計算實驗結(jié)果計算以所測標準品的OD值為橫坐標，標準品的濃度值為縱坐標，在坐標紙上或用相關(guān)軟件繪制標準曲線，并得到直線回歸方程，將樣品的OD值代入方程，計算出樣品的濃度。試劑盒性能試劑盒性能1.檢測范圍：75pgmL–2400pgmL。2.靈敏度：最低檢測濃度小于10pgmL。3.特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反