鹽分對鹽地堿蓬硝態(tài)氮累積和還原的影響.pdf

1、本文以抗鹽性很強又有重要利用價值的鹽地堿蓬（Suaeda salsa L.）為材料，利用轉錄組測序、熒光定量PCR技術結合生理指標的測定，對高鹽低氮條件下鹽地堿蓬NO3-累積和還原的機制進行初步探究，期望能為鹽生植物氮素營養(yǎng)研究提供理論依據(jù)。
　　本研究主要內容包括：⑴從轉錄組中篩選的六個可能與硝態(tài)氮累積和還原相關的CLC和NR基因進行熒光定量PCR。結果表明，在0.5 mM NO3-水平上，200mM NaCl處理條件下鹽地堿蓬

2、葉片中CLC-b和CLC-c2的表達量與對照組相比是上升的，CLC-c1的表達量與對照組相比沒有發(fā)生顯著變化；400mM NaCl處理條件下，CLC-b的表達量與對照組相比是下降的；CLC-c1和CLC-c2的表達量與對照組相比是上升的。在0.5 mM NO3-水平上，200 mM NaCl條件下鹽地堿蓬葉片中NR-1和NR-2的表達量與對照組相比是上升的，NR-3的表達量下降，400mM NaCl條件下，NR-1的表達量與對照組相比是

3、下降的，NR-2和NR-3的表達量與對照組相比是上升的。與對照相比，200mM NaCl處理的鹽地堿蓬葉片中NO3-含量以及NR活性升高，400 mM NaCl處理時降低。NO3-含量和NR活性結合熒光定量PCR的結果說明CLC-b與NR-1的基因表達的趨勢與生理指標的測定結果是一致的，這兩個基因可能與鹽地堿蓬 NO3-累積和還原相關的基因。本文重點對可能與NO3-積累相關的CLC-b進行了研究（暫時命名為SsCLC-1）進行了克隆。2

4、00 mM NaCl并沒有降低鹽地堿蓬葉片中的葉綠素、游離氨基酸和可溶性蛋白的含量。400 mM NaCl條件下葉綠素含量降低，游離氨基酸和可溶性蛋白的含量增加。結合基因的表達結果和生理指標的測定結果，說明了鹽地堿蓬在低氮生境中葉片能夠積累較多的 NO3-，以便在外界硝態(tài)氮缺乏時利用自身儲存的 NO3-來維持正常的氮代謝，這可能是鹽地堿蓬能在高鹽低氮環(huán)境中正常生長的重要機制之一。⑵根據(jù)轉錄組測序得到的基因片段，通過 NCBI進行 Bla

5、st，得到與其它物種相似度較大的中間片段，設計引物得到SsCLC-1基因的中間片段。再通過5' RACE和3' RACE技術克隆得到5'片段和3'片段，拼接全長后設計兩端特異引物進行全長克隆。該基因編碼區(qū)共有2427 bp，編碼808個氨基酸，蛋白質相對的分子質量約為8.9 kDa、理論等電點 pI為8.38，總共包括12717個原子，分子式為C4056H6429N1053O1144S35。蛋白質的一級結構分析表明，該基因編碼強酸性氨基

6、酸73個，強堿性氨基酸78個；疏水氨基酸326個，極性氨基酸147個；該蛋白的不穩(wěn)定指數(shù)為34.3，脂肪指數(shù)為106.78，該蛋白為穩(wěn)定蛋白。親水性和疏水性分析表明該蛋白為疏水性蛋白。蛋白二級結構組分中，無規(guī)則卷曲（C）占43.81％，α-螺旋（H）占33.42%，β-折疊（E）占22.77%。經過同源序列比對后發(fā)現(xiàn)，該基因與高堿蓬（Suaeda altissima） CLC-1基因同源性最高，同源性為95%；與甜菜（Beta vulg