東南大學(xué)研究生07生化真題

1、2007生化名詞解釋30分1.肽單元：肽單元（peptideunit），肽鍵中的4個原子及相鄰的2個αC原子重復(fù)形成的長鏈結(jié)構(gòu)。對肽鏈的一級結(jié)構(gòu)而言，是肽鏈中的氨基酸殘基；對肽鏈的高級結(jié)構(gòu)而言，則是肽鍵組成的肽平面。2.模體：模體(motif)屬于蛋白質(zhì)的超二級結(jié)構(gòu)，由2個或2個以上具有二級結(jié)構(gòu)的的肽段，在空間上相互接近，形成一個特殊的空間構(gòu)象，并發(fā)揮專一的功能。一種類型的模體總有其特征性的氨基酸序列。3.抑癌基因：抑癌基因也稱為抗癌基

2、因。正常細胞中存在基因，在被激活情況下它們具有抑制細胞增殖作用，但在一定情況下被抑制或丟失后可減弱甚至消除抑癌作用的基因。正常情況下它們對細胞的發(fā)育、生長和分化的調(diào)節(jié)起重要作用。4.核內(nèi)小RNA：smallnuclearRNAsnRNA。它參與真核生物細胞核中RNA的加工。snRNA和許多蛋白質(zhì)結(jié)合在一起成為小核核糖核蛋白（snRNP即smallnuclearribonucleoproteins），參與信使RNA前體（premRNA）的

3、剪接，使后者成為成熟mRNA。真核細胞核內(nèi)參與剪接的富含U的小分子RNA。5.酶原酶原：（zymogen）某些酶在細胞內(nèi)合成或初分泌時沒有活性，這些沒有活性的酶的前身稱為酶原(zymogen)使酶原轉(zhuǎn)變?yōu)橛谢钚悦傅淖饔梅Q為酶原激活(zymogenactivation)。6.LCAT：卵磷酯膽固醇酯酰轉(zhuǎn)移酶，通過抽血檢測肝臟疾病及代謝性疾病的一項醫(yī)學(xué)檢測。急性肝炎病人的血漿LCAT活性減弱，酒精性肝病患者血漿LCAT活性增高。7.guan

4、tlybindingprotein：(共十個，不全，一半為英文)二、填空20分(簡單)三、判斷20分三、簡答70分1.蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)與電泳，電泳分離同工酶的原理蛋白質(zhì)分子是由氨基酸首尾相連而成的共價多肽鏈，但是天然蛋白質(zhì)分子并不是走向隨機的松散多肽鏈。每一種天然蛋白質(zhì)都有自己特有的空間結(jié)構(gòu)或稱三維結(jié)構(gòu)，這種三維結(jié)構(gòu)通常被稱為蛋白質(zhì)的構(gòu)象，即蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)。一級結(jié)構(gòu)：構(gòu)成蛋白質(zhì)的單元氨基酸通過肽鍵連接形成的線性序列，為多肽鏈。一級結(jié)構(gòu)稍有變化，

5、就會影響蛋白質(zhì)的功能。二級結(jié)構(gòu)：一級結(jié)構(gòu)中部分肽鏈的彎曲或折疊產(chǎn)生二級結(jié)構(gòu)。多肽鏈的某些部分氨基酸殘基周期性的空間排列。卷曲所形成的二級結(jié)構(gòu)稱為α螺旋，折疊所形成的二級結(jié)構(gòu)稱為折疊片。這兩種二級結(jié)構(gòu)的形成都是由于距離一定的—N—H基團和—C=O基團之間形成氫鍵的。三級結(jié)構(gòu)：在二級結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)上進一步折疊成緊密的三維形式。三維形狀一般都可以大致說是球狀的或是纖維狀的。四級結(jié)構(gòu)：由蛋白質(zhì)亞基結(jié)構(gòu)形成的多于一條多肽鏈的蛋白質(zhì)分子的空間排列。超二級

6、結(jié)構(gòu)：是指在多肽鏈內(nèi)順序上相互鄰近的二級機構(gòu)常常在空間折疊中靠近，彼一、待測核酸樣品的制備（一）制備待測DNA（二）DNA限制酶消化二、瓊脂糖凝膠電泳分離待測DNA樣品Southern印跡雜交是先將DNA樣品(含不同大小的DNA片段)先按片斷長短進行分離，然后進行雜交。這樣可確定雜交靶分子的大小。因此，制備DNA樣品后需要進行電泳分離。在恒定電壓下，將DNA樣品放在0.8～1.0%瓊脂糖凝膠中進行電泳，標準的瓊脂糖凝膠電泳可分辨70－8

7、0000bp的DNA片段，故可對DNA片段進行分離。但需要用不同的膠濃度來分辨這個范圍內(nèi)的不同的DNA片段。原則是分辨大片斷的DNA需要用濃度較低的膠，分辨小片段DNA則需要濃度較高的膠。經(jīng)過一段時間電泳后，DNA按分子大小在凝膠中形成許多條帶，大小相同的分子處于同一條帶。另外為了便于測定待測DNA分子量的大小，往往同時在樣品鄰近的泳道中加入已知分子量的DNA樣品即標準分子量DNA（DNAmarker）進行電泳。DNAmarker可以用

8、放射性核素進行末端標記，通過這種方式，雜交后的標準分子量DNA也能顯影出條帶。步驟：1.制備瓊脂糖凝膠2.分子質(zhì)量標志物（DIG標記）上樣3.電泳，使DNA條帶很好的分離。4.評價靶DNA的質(zhì)量。在電泳結(jié)束后，0.250.50μgmlEB染色1530min，紫外燈下觀察凝膠。三、電泳凝膠預(yù)處理四、轉(zhuǎn)膜即將凝膠中的單鏈DNA片段轉(zhuǎn)移到固相支持物上。而此過程最重要的是保持各DNA片段的相對位置不變。DNA是沿與凝膠平面垂直的方向移出并轉(zhuǎn)移到

9、膜上，因此，凝膠中的DNA片段雖然在堿變性過程已經(jīng)變性成單鏈并已斷裂，轉(zhuǎn)移后各個DNA片段在膜上的相對位置與在凝膠中的相對位置仍然一樣，故而稱為印跡（blotting）。用于轉(zhuǎn)膜的固相支持物有多種，包括硝酸纖維素膜（NC膜）、尼龍（Nylon）膜、化學(xué)活化膜和濾紙等，轉(zhuǎn)膜時可根據(jù)不同需要選擇不同的固相支持物用于雜交。其中常用的是NC膜和Nylon膜五、探針標記探針標記的方法有隨機引物法、切口平移法和末端標記法。六、預(yù)雜交（prehybr

10、idizafion）七、Southern雜交步驟1.將標記的DNA探針置沸水浴10min，迅速置冰上冷卻12min，使DNA變性。2.從水浴中取出含有濾膜和預(yù)雜交液的塑料袋，剪開一角，將變性的DNA探針加到預(yù)雜交液中。3.盡可能除取袋中的空氣，封住袋口，滯留在袋中的氣泡要盡可能地少，為避免同位素污染水浴，將封好的雜交袋再封入另一個未污染的塑料袋內(nèi)。4.置42℃水浴溫育過夜（至少18h）。八、洗膜九、放射性自顯影檢測五、計算10分簡單，計