酶抑制法檢測蔬菜中的有機磷農(nóng)藥殘留的方法研究.pdf

1、自有機氯農(nóng)藥被禁用以來，有機磷農(nóng)藥成為我國使用量最大的農(nóng)藥，廣泛使用中的有機磷農(nóng)藥品種屬于高毒性農(nóng)藥，大量使用會造成許多潛在的危害，如污染環(huán)境、藥害及人畜中毒等，尤其是由蔬菜中有機磷農(nóng)藥殘留所引起的中毒現(xiàn)象十分嚴重。要預防和處理有機磷農(nóng)藥引起的環(huán)境、食品污染等問題，最有效的策略就是及時、準確檢測有機磷農(nóng)藥。近年來有許多關(guān)于有機磷農(nóng)藥殘留的快速檢測方法的報道，這些快速檢測方法大都是基于酶抑制的原理。 本文利用酶抑制原理，采用植物酯

2、酶和乙酰膽堿酯酶法檢測有機磷農(nóng)藥殘留。主要包括以下五個方面的內(nèi)容： 1．綜述了酶抑制法檢測有機磷農(nóng)藥殘留檢測方法的進展。根據(jù)酶的來源可以分為：植物酯酶法和乙酰膽堿酯酶法。在植物酯酶法中根據(jù)顯色原理的不同主要有固藍B鹽法和2，6-二氯靛酚鈉鹽法；乙酰膽堿酯酶法的顯色劑主要是DTNB顯色。乙酰膽堿酯酶比較昂貴，需要從動物中提取，過程復雜，只能在大城市的一些超市里使用，也不可能在全國范圍內(nèi)推廣使用。植物酯酶便宜易得，提取方便，在有機磷

3、的快速測定中有更廣泛的應用價值。 2．采用固藍B鹽法對來源于玉米粉和面粉的植物酯酶進行比較，篩選出酶活性強得多的面粉酶作為檢測用酶，并對影響酶活性的條件進行了優(yōu)化研究，確定了植物酯酶的最佳活性反應條件是pH7.5，溫度45℃。同時還對該法檢測農(nóng)藥的各影響因子進行了分析研究，確定了一個比較適宜的農(nóng)藥檢測反應體系條件，并發(fā)現(xiàn)農(nóng)藥在0～2.5μg／mL范圍內(nèi)，三種農(nóng)藥對植物酯酶的抑制作用與農(nóng)藥濃度基本上呈現(xiàn)的是線性關(guān)系。當以抑制率15

4、％作為檢測閾值時，樂果、敵敵畏、辛硫磷的檢出限分別為0.3、0.2、0.1mg／kg，用于實際樣品有機磷農(nóng)藥檢測時，能定性的檢測出農(nóng)藥是否超標。 3．對2，6-二氯靛酚鈉鹽法檢測農(nóng)藥含量的各影響因子進行了分析研究，發(fā)現(xiàn)結(jié)果與固藍B鹽法相類似，確定了適合該方法的各個反應條件，并發(fā)現(xiàn)農(nóng)藥在0～2.5μg／mL范圍內(nèi)，三種農(nóng)藥對植物酯酶的抑制作用與農(nóng)藥濃度基本上呈現(xiàn)的也是線性關(guān)系。該方法與國標相比，結(jié)果的靈敏度不夠高，主要原因可能是提

5、取的酶未經(jīng)純化所致，但當以吸光度0.5～0.6作為檢測閾值時，該方法的樂果、敵敵畏、辛硫磷的檢出限都在國標同種方法的檢出限范圍內(nèi)。 4．對乙酰膽堿酯酶活性的影響條件進行了優(yōu)化研究，確定了乙酰膽堿酯酶的最佳活性反應條件是pH8.0，溫度45℃。同時還對乙酰膽堿酯酶法檢測農(nóng)藥的各影響因子進行了分析研究，確定了一個適宜的農(nóng)藥檢測反應體系，并發(fā)現(xiàn)農(nóng)藥在1.0×10〈'-4〉～1.0μg／mL范圍內(nèi)，三種農(nóng)藥對植物酯酶的抑制作用與農(nóng)藥濃度

6、呈線性關(guān)系。當以抑制率15％作為檢測閾值時，樂果、敵敵畏、辛硫磷的檢出限的數(shù)量級在10<’-4>mg/kg，其靈敏度高于植物酯酶法。 5．測定兩種酶的各種檢測方法的平均回收率，并進行實際蔬菜樣品中有機磷農(nóng)藥殘留的檢測，發(fā)現(xiàn)這兩種酶方法對于有機磷農(nóng)藥殘留檢測的初步篩選都是可行的，兩種方法的回收率基本上都在83.14％～114.8％之間，在要求的范圍之內(nèi)。只有在固藍B鹽法測定辛硫磷時，回收率為79.99％，接近80％，而且變異系數(shù)不