takara反轉(zhuǎn)錄試劑盒說(shuō)明書

1、 研究用 研究用 Code No. Code No. RR047A RR047A 說(shuō)明書 說(shuō)明書 PrimeScript PrimeScript? RT reagent Kit RT reagent Kit with gDNA Eraser with gDNA Eraser (Perfect Real Time) (Perfect Real Time) v201 v20151 512Da Da -1- ● 制品說(shuō)明 制品說(shuō)明

2、為了準(zhǔn)確地進(jìn)行基因表達(dá)量分析，必須滿足只有 cDNA 作為模板檢出的先決條件，但 Total RNA 中常?；煊谢蚪M DNA，并可以直接作為 PCR 反應(yīng)的模板進(jìn)行擴(kuò)增，因此會(huì)造成解析結(jié)果不準(zhǔn)確。為了避免這種情況發(fā)生，通常將檢測(cè)用引物設(shè)計(jì)在內(nèi)含子前后的外顯子上，使基因組 DNA 得不到擴(kuò)增。但是，此方法不適合具有單個(gè)外顯子的基因或兩個(gè)外顯子之間所跨的內(nèi)含子過(guò)小的基因， 同時(shí)當(dāng)基因組上有偽基因存在時(shí)、 或設(shè)計(jì)引物對(duì)基因組有非特異性擴(kuò)增時(shí)

3、、 以及基因信息沒(méi)被完全解析的生物種等也同樣不適合于本方法。在這種情況下，我們常常需要對(duì) Total RNA 樣品進(jìn)行 DNase I 處理，以除去殘存的基因組 DNA。而 DNase I 處理通常要進(jìn)行復(fù)雜的純化操作，同時(shí)會(huì)造成 RNA 的降解和損失。 PrimeScript RT reagent Kit with gDNA Eraser 是可以除去基因組 DNA 進(jìn)行 Real Time RT-PCR 反應(yīng)的專用反轉(zhuǎn)錄試劑。Kit

4、中使用了具有較強(qiáng) DNA 分解活性的 gDNA Eraser，通過(guò) 42℃，2 min 即可除去基因組 DNA。同時(shí)由于反轉(zhuǎn)錄試劑中含有抑制 DNA 分解酶活性的組分，經(jīng)過(guò) gDNA Eraser 處理后的樣品可以直接進(jìn)行 15 min 的反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)合成 cDNA，因此，20 min 內(nèi)即可迅速完成從基因組 DNA 去除到 cDNA 合成的全過(guò)程。 使用本制品合成的cDNA適用于SYBR® Green分析法和TaqMan

5、74;探針?lè)治龇?，可以根?jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康?，選擇與SYBR Premix Ex Taq? II（Tli RNaseH Plus） （Code No. RR820Q/A/B） 、Probe qPCR Mix（Code No. RR391S/A/B）組合使用。 注意： 注意：Takara Bio 使用 SYBR® Green I 作為研究試劑已得到 Molecular Probes Inc.的許可。 SYBR®為 Molecu

6、lar Probes Inc.的注冊(cè)商標(biāo)。 ● 制品內(nèi)容 制品內(nèi)容（20 20 μl 反應(yīng)× 反應(yīng)×100 100 次） 次） 1. gDNA Eraser 100 μl 2. 5×gDNA Eraser Buffer*1 200 μl 3. PrimeScript RT Enzyme Mix I*2 100 μl 4. 5×PrimeScript Buffer 2（for Real

7、Time）*3 400 μl 5. RT Primer Mix*4 400 μl 6. RNase Free dH2O 1 ml×2 7. EASY Dilution（for Real Time PCR）*5 1 ml *1： 5×gDNA Eraser Buffer 在反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)前使用，請(qǐng)務(wù)必進(jìn)行基因組 DNA 的除去反應(yīng)。 *2： 含有 RNase Inhibitor。 *3： 含有 dNTP Mix

8、ture。 *4： 含有 Oligo dT Primer 和 Random 6 mers。 *5： 制作標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)梯度稀釋 cDNA 或 RNA 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋液。 模板 DNA 或 RNA 如果用水或 TE Buffer 稀釋時(shí)，由于受 Microtube 吸附作用等的影響，往往不能準(zhǔn)確地進(jìn)行稀釋，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果精度降低。使用本制品時(shí)，即使稀釋至低濃度也能夠進(jìn)行準(zhǔn)確地稀釋，容易在寬廣范圍內(nèi)獲得準(zhǔn)確定量的標(biāo)準(zhǔn)曲線。本制品不影響反轉(zhuǎn)錄和 PC

9、R 反應(yīng)，用其稀釋后的樣品可直接使用。EASY Dilution（for Real Time PCR） （Code No. 9160）也可以單獨(dú)購(gòu)買。 注意： 注意：EASY Dilution（for Real Time PCR）請(qǐng)與本公司 Real Time PCR 試劑組合使用，對(duì)于其他公司的同類制品的適用性本公司尚未進(jìn)行確認(rèn)。 ● 試劑盒外必備材料 試劑盒外必備材料 熱循環(huán)儀（或 37℃水浴，42℃水浴和 85℃加熱塊） 反轉(zhuǎn)錄反