大氣壓低溫等離子體對黑色素瘤細胞的作用及機制.pdf

1、大氣壓低溫等離子體(cold atmospheric plasma, CAP)是近年來學(xué)術(shù)界興起的新型研究領(lǐng)域，由于其在大氣壓下產(chǎn)生，氣體溫度接近室溫，活性高，因此在慢性傷口愈合、滅菌消毒、血液凝結(jié)、癌癥治療方面引起了研究人員廣泛關(guān)注。盡管眾多研究證明等離子體能夠誘導(dǎo)多種癌細胞凋亡，但等離子體引起癌細胞凋亡的機理還不完全清楚。因此，本文主要研究了大氣壓常溫等離子體射流對黑色素瘤細胞影響及引起細胞凋亡的分子機理。主要研究內(nèi)容包括以下幾個方

2、面：
　　(1)考察了CAP對多種腫瘤細胞生長的影響。通過顯微鏡觀察到CAP引起B(yǎng)16細胞皺縮，細胞形態(tài)發(fā)生了明顯的改變；接著MTT檢測到CAP對肝癌細胞（HepG2）、小鼠黑色素瘤細胞（B16）、子宮頸癌細胞（HeLa）、乳腺癌細胞(MCF-7)和小鼠內(nèi)皮細胞增殖作用都有明顯的抑制作用，但對正常小鼠內(nèi)皮細胞生存能力的抑制作用比小鼠黑色素瘤細胞的抑制作用要弱。
　　(2)研究了CAP引起B(yǎng)16細胞凋亡的機理。以B16細胞為主

3、要研究對象, PI染色和AnnexinV/PI雙染檢測了CAP對細胞凋亡的影響；硝酸還原酶法和DCFH探針法分別用于檢測CAP對細胞內(nèi)NO含量和ROS水平變化的影響；緊接著使用JC-1探針檢測了細胞內(nèi)線粒體膜電位的變化；在此基礎(chǔ)上進一步檢測分析了線粒體細胞色素c含量的變化；最后通過 RT-PCR和 Western-blot等實驗方法進一步在轉(zhuǎn)錄和翻譯水平上分析了Bcl-2/Bax表達水平的變化。結(jié)果表明:B16細胞經(jīng)等CAP處理后，PI

4、及AnnexinV/PI染色后陽性細胞數(shù)目明顯增加,細胞內(nèi)線粒體凋亡通路被激活，細胞內(nèi)NO和ROS水平上升,線粒體膜電勢下降，細胞色素c釋放，Bcl-2表達水平明顯下調(diào),而Bax表達水平上調(diào),最終導(dǎo)致B16細胞凋亡。
　　(3)研究了CAP影響B(tài)16細胞周期的機制。通過PI染色細胞、流式細胞儀觀察各個周期細胞的分布情況;采用RT-PCR和Western-blot的方法檢測細胞周期相關(guān)基因、蛋白的表達。結(jié)果表明, CAP對B16細胞