電化學(xué)發(fā)光DNA分析方法的研究.pdf

1、陜西師范大學(xué)碩士學(xué)位論文電化學(xué)發(fā)光DNA分析方法的研究姓名：李延申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：分析化學(xué)指導(dǎo)教師：張成孝20050501DNA自組裝固定化技術(shù)將高靈敏度的ECL檢測(cè)手段應(yīng)用于生命物質(zhì)DNA的序列識(shí)別及含量測(cè)定。以Ru(bpy)2(dcbpy)NHS為標(biāo)記物制備f“DNA—ECL探針，研究了DNAECI標(biāo)記物的電化學(xué)發(fā)光性能并基此建立了電化學(xué)發(fā)光分析法檢測(cè)特定序列DNA的分車廳方法。通過包紐裝技術(shù)將5末端帶有巰基筑目標(biāo)一ssl3N

2、A(HSssDNA)固定到金電極上，然后與標(biāo)記有釘聯(lián)毗啶衍生物的己知序列ssDNA進(jìn)行雜交反應(yīng)，最后通過電化學(xué)發(fā)光信號(hào)的變化對(duì)特殊序歹[JDNA]Jfl以測(cè)定。電化學(xué)發(fā)光分析信號(hào)與待j91llDNA濃度在341010—3410’7mol／L區(qū)間呈線性關(guān)系方法檢測(cè)限為12xlff田mol／L。對(duì)3，410甚mol，L的待測(cè)DNA進(jìn)行11次測(cè)定，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為47％。初步實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本文提出的以釘聯(lián)吡啶為標(biāo)記物結(jié)合自組裝技術(shù)建立的電化學(xué)發(fā)

3、光DNA分析方法是可行的。2，Z基于夾心雜交技術(shù)電化學(xué)發(fā)光分析法檢瀏特定序列DNA的研究由于利用自組裝法將HS—ssDNA直接固定DNA到電極上，ECL檢測(cè)的DNA鏈端需要巰基修飾，應(yīng)用上受到一定的限制。本部分我們提出了電化學(xué)發(fā)光檢測(cè)的夾心式DNA雜交分析方法。將DNA夾心雜交技術(shù)用于DNA雜交分析中。使我們要檢測(cè)的DNA無須修飾并且提高DNA的雜交效率。該方法通過自組裝技術(shù)將5’末端修飾有巰基單鏈DNA(HS—ssDNA，捕獲探針)固

4、定到金電極上，捕獲探針與目標(biāo)ssDNA進(jìn)行雜交，淋洗除去未結(jié)合目標(biāo)ssDNA，再與標(biāo)記的檢測(cè)探針ssDNA結(jié)合形成捕獲掾鈴ssDNA目標(biāo)ssDNA標(biāo)記懿撿濺探針ssDNA的夾心式三甥治結(jié)構(gòu)，電化學(xué)發(fā)光分析信號(hào)與目標(biāo)ssDNA濃度在88x10“0~88x10‘8moYL范圍內(nèi)呈線性關(guān)系，檢出限為30x10。omoldL。對(duì)8_810。moYL的目標(biāo)ssDNA進(jìn)行11次測(cè)定，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為49％。初步實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本文提出的基于夾心式DNA

5、雜交測(cè)定特定序列DNA的電化學(xué)發(fā)光分析法是可行的。23納米金組裝電極上電化學(xué)發(fā)光分析法檢測(cè)特定序列DNA的研究作為DNA電化學(xué)發(fā)光分析中不可或缺的重要環(huán)節(jié)，單鏈DNA在電極上的固定化研究具有十分重要的意義，納米材料太的比表面和良好的電子傳遞特性能增強(qiáng)了DNA片段在電極上的固定程度。本文利用16己二硫醇分子為連接劑，將納米金組裝在金電極上。納米金組裝金電極上通過自組裝技術(shù)將s’末端帶有巰基的目標(biāo)ssDNA(HSssDNA)固定到修飾電極上