麥麩酯酶抑制法檢測果蔬中有機磷及氨基甲酸酯類農(nóng)藥的研究.pdf

1、SichuanAgriculturalUniversityMaster’SDegreeDissertationEnzymeInhibitionDeterminationMethodoforganophosphorusandCarbamatePesticidesWithEsterasefromWheatBranMajorByJiangLuDirectedbyProfZhangZhiqingFoodScienceMay2016摘要農(nóng)產(chǎn)品中的

2、農(nóng)藥殘留問題已越來越引起各國政府和公眾的關(guān)注，因此必須對農(nóng)藥使用加以控制，加強農(nóng)藥殘留的檢測力度。酶抑制法快速檢測農(nóng)藥殘留技術(shù)對所測樣品的前處理要求簡單、成本低、檢測時間短，非常適合我國小規(guī)模、分散的銷售體系中經(jīng)常性的現(xiàn)場快速檢測，而且由于植物酯酶來源廣、成本低、提取方便、易保存等優(yōu)點，弓l起許多學者的關(guān)注，以期能替代乙酰膽堿酯酶。麥麩是小麥加工的副產(chǎn)物，產(chǎn)量約占小麥加工量的20％，來源更廣、價格更低廉。本研究以麥麩為原料提取麥麩酯酶，

3、探索了麥麩酯酶純化前后對有機磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥的敏感性及動力學常數(shù)，并對檢測方法中前處理的優(yōu)化、假陽性的消除進行研究。主要研究結(jié)果如下：1通過比色法研究了酶抑制法檢測農(nóng)殘時表面活性劑對固藍B鹽顯色體系的增敏作用及農(nóng)藥最佳抑制時間。結(jié)果表明：以陰離子表面活性劑SDS作為增敏劑，在吸收波長535nm處檢測，可使反應體系相對吸光度值增加了15276％。在酶活抑制率測定時除葉蟬散外，其余5種農(nóng)藥對麥麩酯酶的最佳抑制時間為30min，而葉蟬散最

4、佳抑制時間為40min。2在酶抑制法最佳檢測體系下以酶活抑制率為指標，分別研究了純化前后的麥麩酯酶對6種農(nóng)藥的敏感性及最低檢測限。結(jié)果顯示：未經(jīng)純化的麥麩酯酶對6種農(nóng)藥的最低檢測限范圍是0006～045mg／L，與GB27632014規(guī)定的最大殘留量相比，除甲基對硫磷之外，均可滿足對敵敵畏、樂果、葉蟬散、丁硫克百威、西維因5種農(nóng)藥的檢測要求。而經(jīng)過凝膠層析后的麥麩酯酶對6種農(nóng)藥的最低檢測限范圍是00030193mg／L，其靈敏度比粗酶液

5、提高了11~23倍。經(jīng)過雙水相萃取的麥麩酯酶對6種農(nóng)藥的最低檢測限范圍是O0050116mg／L，其靈敏度比粗酶液提高了13522倍。而經(jīng)過硫酸銨鹽析后的麥麩酯酶對6種農(nóng)藥的最低檢測限范圍是00394)386mg／L，該麥麩酯酶對農(nóng)藥的敏感性明顯低于未經(jīng)純化的麥麩酯酶。3通過雙分子反應速率常數(shù)的測定方法，利用可見分光光度計測定了6種農(nóng)藥抑制麥麩酯酶動力學常數(shù)(Kj、K。、K2)及IC50值。比較動力學常數(shù)及ICso值發(fā)現(xiàn)，各農(nóng)藥對麥麩酯