靛紅鍵合硅膠液相色譜固定相的制備、表征及應(yīng)用.pdf

1、中藥是我國的國粹，主要由植物藥(根、莖、葉、果)、動(dòng)物藥(內(nèi)臟、皮、骨、器官等)和礦物藥組成。因植物藥占中藥的大多數(shù)，所以中藥也常稱中草藥。中草藥中的有效化學(xué)成分作為防病治病的基礎(chǔ)，有著多種藥理功能，目前也得到了廣泛的重視和開發(fā)，但是以中藥的有效成分作為色譜固定相的配體，開發(fā)其色譜功能，這方面的研究不多?；谥兴帪樘烊坏漠a(chǎn)物，其有效成分含天然的結(jié)構(gòu)，存在多種活性基團(tuán)和作用位點(diǎn)，能與許多物質(zhì)發(fā)生相互作用，作用力豐富，且原料易得，成本低廉，

2、甚至有抗菌抗病毒等功能，故作為固定相的配體，不僅具有多作用位點(diǎn)的功能，還有助于延長(zhǎng)柱子壽命的功能。除分離分析功能外，有望開發(fā)工業(yè)色譜分離材料，用于中草藥活性成分的選擇性富集與分離，減輕常規(guī)溶劑提取法對(duì)環(huán)境的污染。所以，天然產(chǎn)物有效成分作為色譜固定相的配體有著廣泛的開發(fā)前景和應(yīng)用價(jià)值，對(duì)更深層次地開發(fā)我國寶貴的中草藥資源有著重要的意義。 本學(xué)位論文采用中藥有效成分靛紅作為配體，成功地制備了一種新型的色譜固定相--靛紅鍵合硅膠固定相

3、(ISSP)，表征和評(píng)價(jià)了固定相的結(jié)構(gòu)及其色譜性能，探討其色譜分離機(jī)理，并將其應(yīng)用于中草藥等復(fù)雜成分的分離分析中。論文工作主要涉及新固定相的的制備及其色譜功能的研究，主要研究?jī)?nèi)容如下： 1.從色譜固定相的基質(zhì)、配體、制備、色譜分離機(jī)理及其應(yīng)用出發(fā)，系統(tǒng)地綜述了近年來國內(nèi)外高效液相色譜鍵合硅膠固定相的研究進(jìn)展，展望了中草藥活性成分作為色譜固定相的配體在分離科學(xué)中的應(yīng)用前景，并以此作為本論文選題的依據(jù)。 2.采用固液相表面連

4、續(xù)反應(yīng)法，以硅膠為基質(zhì)，γ-[(2，3)-環(huán)氧丙氧]丙基三甲氧基硅烷(KH-560)為偶聯(lián)劑，靛紅作為配體，三乙胺和高氯酸作為催化劑，在溫和的條件下，首次制備了靛紅鍵合硅膠固定相(ISSP)。該固定相為棕紅色固體，采用紅外光譜法、熱重分析法和元素分析法對(duì)其結(jié)構(gòu)進(jìn)行表征。結(jié)果表明，靛紅被成功地鍵合到硅膠表面上，并測(cè)得每克硅膠的鍵合量為0.294mmol，且該固定相具有良好的熱穩(wěn)定性。 3.以聯(lián)苯為溶質(zhì)探針，在甲醇-水為流動(dòng)相(50

5、:50，v/v，0.8 mLmin-1，29℃)的條件下，測(cè)得ISSP的理論塔板數(shù)為18680塊/米，且在有機(jī)溶劑和酸性流動(dòng)相的長(zhǎng)時(shí)間沖洗下，其保留時(shí)間和柱效變化很小，說明ISSP色譜柱鍵合層較穩(wěn)定。采用目前較為通用的Kimata提出的有關(guān)反相鍵合固定相的評(píng)價(jià)方法，較系統(tǒng)地評(píng)價(jià)ISSP的基本色譜性能，包括疏水能力、氫鍵能力、立體選擇能力和離子交換能力等。結(jié)果表明，所制備的新固定相具有良好的疏水性反相色譜特性，擁有較強(qiáng)的氫鍵能力、較高的立

6、體選擇性和適中的離子交換能力。再以稠環(huán)芳烴和中性、酸性、堿性的混合物為溶質(zhì)探針，探討新固定相對(duì)不同類型化合物的色譜分離機(jī)理和特點(diǎn)。結(jié)果表明，ISSP除疏水性外，還能與溶質(zhì)間能發(fā)生氫鍵作用、π-π或n-π電荷轉(zhuǎn)移作用以及偶極-偶極作用，多種作用力的共同作用使得ISSP能夠克服ODS單一疏水作用機(jī)理的不足。實(shí)驗(yàn)還以吡啶、苯胺、鄰甲苯胺三種堿性小分子為溶質(zhì)，考察固定相的親硅醇基效應(yīng)，結(jié)果表明，新固定相的配體和鍵合臂有利于抑制親硅醇基效應(yīng)。

7、 4.用ISSP分離部分含氮堿基和水溶性維生素，研究了溶質(zhì)在新固定相上的色譜行為及各種因素對(duì)色譜分離的影響，并優(yōu)化色譜條件，為進(jìn)一步的應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。結(jié)果表明，上述溶質(zhì)在ISSP上的分離效果明顯優(yōu)于ODS，這是因?yàn)镮SSP與溶質(zhì)之間存在氫鍵作用、π-π電荷轉(zhuǎn)移作用、偶極-偶極作用和靜電作用等，對(duì)極性溶質(zhì)有較好的分離選擇性；另外，由于其疏水性弱于ODS，故對(duì)脂溶性成分保留適度，有利于快速分離和提高柱效，一定程度上說，其等度洗脫有望部分代

8、替ODS梯度洗脫模式，對(duì)復(fù)雜體系的分離具有較好的應(yīng)用前景。 5.黃酮類化合物是一類具有廣泛藥用價(jià)值的中草藥有效成分。在上述色譜性能的評(píng)價(jià)基礎(chǔ)上，將ISSP用于分離6種常見的黃酮類化合物，從固定相及溶質(zhì)結(jié)構(gòu)的角度，考察新固定相色譜保留機(jī)理和對(duì)黃酮類化合物的分離能力，同時(shí)，也將ISSP應(yīng)用于中草藥葛根和中成藥金膽片提取液等的分離分析，初步考察其對(duì)復(fù)雜樣品的色譜分離能力。結(jié)果表明，ISSP對(duì)中草藥中的黃酮類等含有多種取代基的極性化合物