保健食品中黃酮類功效成分的LC-MS檢測技術(shù)研究.pdf

1、目的:
　　采用液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)對保健食品中黃酮類功效成分進行快速篩選，建立準確可靠的定性定量方法，為保健食品的質(zhì)量標準研究提供一定的研究思路和方法示范。所建立的方法可應用于生產(chǎn)企業(yè)，也可應用于檢測、監(jiān)管機構(gòu)，從而更好地對保健食品進行質(zhì)量控制和監(jiān)管，打擊假冒偽劣商品，規(guī)范保健食品市場。
　　方法:
　　對13個含銀杏葉保健食品、13個含大豆異黃酮保健食品、葛根枳棋軟膠囊和蜂膠液進行示范性研究。
　　1、保健食品樣品收

2、集。從市面上收集具有代表性的不同批號、不同廠家、不同包裝、不同劑型同一主要原料的保健食品，按照原標準《保健食品檢驗與評價技術(shù)規(guī)范》（2003年版）收載項下的質(zhì)量評價方法進行檢測，判斷是否為合格產(chǎn)品。
　　2、采用超高效液相色譜-四極桿-飛行時間質(zhì)譜法快速篩查保健食品中多種黃酮類化合物。分別對色譜柱、流動相體系、數(shù)據(jù)采集模式、離子源參數(shù)和碰撞能量等參數(shù)進行優(yōu)化，并通過與對照品對比、數(shù)據(jù)庫匹配及文獻數(shù)據(jù)分析，明確保健食品中所含的黃酮類

3、成分。
　　3、采用超高效液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜法建立同時測定保健食品中多種黃酮類化合物的定量分析方法。采用負離子電噴霧選擇反應監(jiān)測（SRM）模式，分別對管鏡補償電壓、碰撞能量和定量離子對等參數(shù)進行優(yōu)化，同時進行檢測限、定量限、線性范圍、精密度、重復性、穩(wěn)定性和加樣回收率等方法學考察。
　　4、以相關(guān)功效成分及其含量為指標，對不同來源含銀杏葉保健食品和含大豆異黃酮保健食品的差異進行比較研究。
　　5、對所檢測的每個黃

4、酮類化合物的裂解途徑進行解析，總結(jié)黃酮類化合物電噴霧質(zhì)譜(ESI-MSn)特征裂解規(guī)律，為建立黃酮類成分目標物的精確分子量、二級MS2質(zhì)譜圖的數(shù)據(jù)庫及一定色譜條件下保留時間的數(shù)據(jù)庫奠定基礎(chǔ)。
　　結(jié)果:
　　1、參照原質(zhì)量標準方法進行檢測，市場上部分保健食品的功效成分含量未達到企業(yè)標準中功效成分的標示量。
　　2、采用超高效液相色譜-四極桿-飛行時間質(zhì)譜法快速篩查了13個含銀杏葉保健食品中16種黃酮類化合物、13個含大

5、豆異黃酮保健食品中6種異黃酮類化合物、葛根枳棋軟膠囊中20種黃酮類化合物及蜂膠液中16種黃酮類化合物。
　　3、采用超高效液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜聯(lián)用法同時檢測含大豆異黃酮保健食品中6種異黃酮化合物的含量:在4分鐘內(nèi)完成了對大豆苷、黃豆黃苷、染料木苷、大豆苷元、黃豆黃素和染料木素6種異黃酮化合物的定量檢測;并將結(jié)果與采用普通高效液相色譜法測得的數(shù)據(jù)進行比較，結(jié)果表明，本方法快速、簡便可靠、專一性好。
　　4、比較了不同來源保

6、健食品成分與含量的差異:同一產(chǎn)品，由不同經(jīng)銷商售賣時更換包裝，價格偏差幅度大，產(chǎn)品質(zhì)量無明顯差異;不同批號的同一產(chǎn)品，存大較大的質(zhì)量差異，這可能與生產(chǎn)企業(yè)內(nèi)部質(zhì)量控制力度不夠有關(guān);含同一主要原料的不同保健食品，所含功效成分存在較大差異，這可能與原料采集、制備工藝、儲存條件等諸多因素有關(guān)。
　　5、黃酮類化合物裂解規(guī)律:黃酮苷元的碎片離子裂解主要發(fā)生在C環(huán)，產(chǎn)生系列C環(huán)裂解的i,jA-與i,jB-特征離子，包括Retro Diels

7、-Alder(RDA)裂解;同時伴隨著丟失CH3、CO、CO2、 H2O、C3O2等中性分子。黃酮O-糖苷的質(zhì)譜裂解主要為糖苷鍵的斷裂、糖糖鍵的斷裂和糖環(huán)的交叉環(huán)切除裂解。黃酮C-糖苷負離子模式下的質(zhì)譜裂解與黃酮O-糖苷的裂解差別較大，黃酮C-糖苷多以糖環(huán)的交叉環(huán)切除裂解為主，幾乎不產(chǎn)生苷元離子，同時也伴隨著丟失中性分子。負離子模式下，己糖裂解產(chǎn)生[M-H-120]-及[M-H-90]-碎片離子，戊糖裂解產(chǎn)生[M-H-60]-及[M-H

8、-90]-碎片離子。
　　結(jié)論:
　　本研究采用液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)對保健食品中黃酮類功效成分進行了快速篩選，建立了準確可靠的定性定量方法，明確了相關(guān)保健食品中黃酮類成分;通過比較市面上同一主要原料不同來源的保健食品中黃酮類功效成分的差異，表明了保健食品存在參差不齊的現(xiàn)象和質(zhì)量標準不統(tǒng)一的問題。提示應加強保健食品的質(zhì)量監(jiān)管，加大保健食品功效成分的基礎(chǔ)性研究工作，努力提高檢測分析水平，為規(guī)范保健食品市場提供技術(shù)支持。本課題所建立的方法