鄰苯二甲酸二甲酯可視化免疫分析方法建立.pdf

1、本論文建立了三種檢測塑化劑鄰苯二甲酸二甲酯(DMP)的可視化快速免疫分析方法，分別是膠體金免疫層析試紙條、量子點免疫層析試紙條和量子點免疫親和凝膠檢測柱，三種方法可以應用于食品中鄰苯二甲酸二甲酯的可視化快速檢測。
　　采用戊二醛法合成鄰苯二甲酸二甲酯包被抗原(DMP-OVA)。鄰苯二甲酸二甲酯的膠體金免疫層析試紙條檢測方法最佳工作條件為:膠體金粒徑為20nm;金標抗體最佳pH值為9;最適抗體用量為20μg/mL;金標抗體稀釋倍數(shù)為

2、1∶5;二抗和包被抗原的的稀釋液均為PBS緩沖溶液，稀釋倍數(shù)分別為1∶130和1∶3;硝酸纖維素膜型號為Milipore HF135s，并用乳粉溶液處理60min;樣品稀釋液為PBS。該試紙條方法檢出限為100μg/L，與其他種類塑化劑無交叉反應，特異性良好。檢測時間小于10分鐘。樣品中鄰苯二甲酸二甲酯檢測限在100-500μg/L(μg/kg)。
　　采用活化酯法制備量子點標記抗體(QDs-Ab)。鄰苯二甲酸二甲酯的量子點標記免

3、疫層析試紙條檢測方法最佳工作條件為:量子點(QDs)與EDC與抗體的摩爾比為1∶1500∶10;量子點標記抗體的最佳pH值為8.4;樣品稀釋液為金標工作液與PB(pH7.4)緩沖溶液的混合液，混合比例為1∶4; QDs-Ab稀釋倍數(shù)為1∶500;包被抗原稀釋倍數(shù)為1∶12;羊抗兔二抗稀釋倍數(shù)為1∶220;硝酸纖維素膜型號為Milipore HF135s;結合墊用0.1％PEG200處理。該試紙條方法檢出限為50μg/L，與其他種類塑化劑

4、無交叉反應，特異性良好。檢測時間小于10分鐘。樣品中鄰苯二甲酸二甲酯檢測限在50-150μg/L(μg/kg)。
　　采用活化酯法制備量子點標記包被抗原(QDs-OVA-DMP)。鄰苯二甲酸二甲酯的量子點免疫親和凝膠檢測柱最佳工作條件為:量子點與EDC與包被抗原的摩爾比為1∶4000∶30;量子點標記抗原(QDs-OVA-DMP)稀釋倍數(shù)為1∶800;樣品稀釋液為濃縮5倍的PB緩沖溶液;反應時間為60s;清洗次數(shù)為5次。該檢測柱的