CD73在動(dòng)脈粥樣硬化進(jìn)程中的作用及其機(jī)制研究.pdf

1、論文題目CD73在動(dòng)脈粥樣硬化進(jìn)程中的作用及其機(jī)制研究StudyontheroleofCD73inartheroselerosis碩士研究生:簡(jiǎn)蓉蓉專業(yè):病理學(xué)與病理生理學(xué)導(dǎo)師:周平副教授導(dǎo)師組成員:殷蓮華教授李曉波講師支秀玲講師2010年5月14日CD73在動(dòng)脈粥樣硬化進(jìn)程中的作用及其機(jī)制研究中文摘要Cn73即胞外一5’一核普酸酶(eeto一5’一nueleotidase，eN)，是由GPI錨定在細(xì)胞膜外表面的糖蛋白。其主要功能是水解

2、AMP生成重要的生理活性物質(zhì)腺普。胞外腺普通過(guò)作用于靶細(xì)胞膜上4種G蛋白偶聯(lián)的腺普受體(AIR、AZaR、AZbR、A3R)，發(fā)揮抑制炎癥、擴(kuò)張血管、提高內(nèi)皮屏障功能、刺激血管新生、抑制血小板聚集、減少自由基產(chǎn)生等作用[l]。近年還有研究發(fā)現(xiàn)I2]，cD73參與了脂肪細(xì)胞中的脂滴形成過(guò)程，而血脂水平增高是動(dòng)脈粥樣硬化(叭herosclerosis，AS)的重要危險(xiǎn)因素，這提示CD73在動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中可能發(fā)揮著重要作用，但

3、是如何發(fā)揮作用及其作用機(jī)制目前國(guó)內(nèi)外尚無(wú)報(bào)導(dǎo)。本課題首先利用CD73一八敲基因小鼠和APoE一八敲基因小鼠進(jìn)行雜交，培育出CD73一八APOE一八雙基因敲除小鼠，然后高脂喂養(yǎng)建立動(dòng)脈粥樣硬化模型，整體水平研究CD73對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成的影響，并探討CD73在動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展中的作用機(jī)制，從而為動(dòng)脈粥樣硬化的防治提供新的靶點(diǎn)及途徑。本研究主要分為三部分:第一部分培育出CD73一八ApoE一八雙基因敲除小鼠。利用CD73一人小鼠與相

4、同遺傳背景APOE一人小鼠雜交，產(chǎn)生的Fl代小鼠與ApoE一人小鼠回交，在其FZ代中篩選出基因型為CD73一ApoE一人的小鼠，再進(jìn)行互交，從F3代中篩選出CD73一人ApoE一人后代。運(yùn)用PCR方法對(duì)小鼠的基因型進(jìn)行鑒定。根據(jù)PCR產(chǎn)物凝膠電泳的結(jié)果，能同時(shí)擴(kuò)增出280bp和245bp片段的小鼠為成功培育的CD73一一ApoE一一小鼠。第二部分選擇CD73一八、CD73、CD73一八ApoE一八及Ap0E一八四組4周齡小鼠予以高脂飼料

5、喂養(yǎng)8周，同樣分組的小鼠予以高脂飼料喂養(yǎng)16周，構(gòu)建動(dòng)脈粥樣硬化模型，檢測(cè)各組小鼠的體重、血脂水平，觀察主動(dòng)脈血管斑塊形成情況。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，CD73一八與CD73小鼠體重、血脂水平無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，而CD73一八Ap0E一八小鼠體重明顯低于ApoE一八小鼠，目CD73一八Ap0E一八小鼠的血漿甘油三酷、總膽固醇、低密度脂蛋白也明顯低于APoE一八小鼠，但高密度脂蛋白和脂蛋白(a)無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。選取左鎖骨卜動(dòng)脈下Zmm開(kāi)始至骼動(dòng)脈分支處