高選擇性反應(yīng)型-OCl熒光探針的設(shè)計(jì)合成及分析應(yīng)用.pdf

1、人體內(nèi)的活性氧物質(zhì)(ROS)是導(dǎo)致各種疾病的主要因素，次氯酸作為活性氧其中的一種，是生物體內(nèi)巨噬細(xì)胞的衍生物,一般情況下，次氯酸應(yīng)用時(shí)濃度大約控制在10-5-10-2 M，然而，高濃度的次氯酸對(duì)人體和動(dòng)物將產(chǎn)生不利影響。機(jī)體內(nèi)，過(guò)量產(chǎn)生的次氯酸將導(dǎo)致感染類(lèi)疾病，例如肺部損傷，類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，腎臟疾病等，次氯酸還可以與一系列生物分子快速響應(yīng)，與多種紊亂型疾病有一定聯(lián)系。另一方面，次氯酸對(duì)于神經(jīng)型退行性疾病有治療作用，例如帕金森與腦出血，同

2、時(shí)，次氯酸可以促進(jìn)線(xiàn)粒體透化，溶酶體捕獲，并可以通過(guò)鈣通道蛋白的激活促使細(xì)胞凋亡。次氯酸作為一種強(qiáng)氧化劑在人體免疫系統(tǒng)中擔(dān)當(dāng)了殺滅病原體的職責(zé)，可以調(diào)控炎癥及細(xì)胞凋亡。正是因?yàn)榇温人嵩诟鞣N生理、病理過(guò)程中擔(dān)當(dāng)著重要的作用，所以實(shí)現(xiàn)在機(jī)體內(nèi)次氯酸的識(shí)別與檢測(cè)已經(jīng)成為化學(xué)學(xué)科發(fā)展中具有挑戰(zhàn)性的前沿課題。
　　但是，次氯酸的檢測(cè)有一定的難度，次氯酸在人體內(nèi)濃度低，氧化性強(qiáng)，壽命短，檢測(cè)次氯酸的方法靈敏度低，選擇性差。目前檢測(cè)次氯酸的小分

3、子熒光探針?lè)N類(lèi)繁多，主要有熒光增強(qiáng)型熒光探針和比率型熒光探針。熒光增強(qiáng)型型熒光探針熒光背景難以去除，探針?lè)植疾痪?，?duì)于定量帶來(lái)了極大的不便。而比率型熒光探針由于發(fā)射峰處于不同波長(zhǎng)處，去除了背景熒光的影響，并且擴(kuò)大了熒光測(cè)定的動(dòng)力學(xué)范圍。
　　本文報(bào)道的檢測(cè)次氯酸的小分子熒光探針發(fā)展了新的響應(yīng)基團(tuán)，首次以鄰位的炔丙基和肟為響應(yīng)基團(tuán)，利用其在次氯酸根作用下發(fā)生環(huán)合反應(yīng)，生成強(qiáng)熒光的共軛體系擴(kuò)展的熒光染料對(duì)次氯酸進(jìn)行檢測(cè)。
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4、一）設(shè)計(jì)合成了以萘為熒光母體，以炔丙氧基與肟基為響應(yīng)基團(tuán)的特異性檢測(cè)次氯酸根的小分子熒光探針。驗(yàn)證了炔丙氧基，肟基對(duì)次氯酸根響應(yīng)的特異性。在此基礎(chǔ)上，設(shè)計(jì)合成了以香豆素為熒光母體的次氯酸根檢測(cè)的小分子熒光探針。該探針熒光背景更低，在次氯酸作用下熒光強(qiáng)度能夠增加約60倍，靈敏度高，選擇性好，檢測(cè)限可以達(dá)到38 nM。在0-100μM次氯酸根的作用下，熒光強(qiáng)度隨濃度增大呈現(xiàn)良好的線(xiàn)性，線(xiàn)性方程為F=5132.84+1643.64[-OCl]

5、μM， R=0.9938，此外探針有良好的光穩(wěn)定性，在生理pH響應(yīng)良好。
　?。ǘ┰O(shè)計(jì)合成了以熒光素為母體的次氯酸根檢測(cè)的小分子熒光探針。激發(fā)波長(zhǎng)在490 nm，發(fā)射波長(zhǎng)在530 nm。探針在5當(dāng)量次氯酸根作用下熒光強(qiáng)度增加了10倍，靈敏度高，選擇性好，在0-40μM次氯酸根濃度范圍內(nèi)，熒光強(qiáng)度隨次氯酸根濃度呈現(xiàn)良好的線(xiàn)性，線(xiàn)性方程為F=1640.49+245.13[-OCl]μM， R=0.9960，并實(shí)現(xiàn)了HepG2細(xì)胞內(nèi)源