信號增強(qiáng)電化學(xué)免疫分析法研究.pdf

1、湖南大學(xué)博士學(xué)位論文信號增強(qiáng)電化學(xué)免疫分析法研究姓名：陳兆鵬申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：分析化學(xué)指導(dǎo)教師：俞汝勤沈國勵20070101信號增強(qiáng)電化學(xué)免疫分析法研究子氧化，基本上不會因催化產(chǎn)物擴(kuò)散到溶液中而使分析信號受到損失。通過陽極溶出法直接檢測電極表面的沉積銀的量，可以大大提高分析的靈敏度，同在同一支電極上的化學(xué)沉積法相比，這種將酶催化反應(yīng)和金屬沉積過程分在兩個不同的電解池中的電化學(xué)法避免了因金屬沉積于蛋白質(zhì)表面對酶的活性的影響。4提出了

2、一種基于辣根過氧化物酶(HRP)對銀沉積的抑制作用的新型電化學(xué)信號放大免疫分析法。在這種方法中，抗體首先通過一層自組裝膜而固定在金電極上，經(jīng)過夾心免疫反應(yīng)后，使HRP酶也結(jié)合在電極表面。當(dāng)有過氧化氫(H202)存在時，HRP酶抑制了對苯二酚還原銀離子在電極表面沉積為單質(zhì)銀的過程。我們采用了線性掃描伏安法檢測電極表面沉積的銀的量，結(jié)果表明銀的溶出峰電流與人免疫球蛋白IgG的濃度在502500he／mL范圍內(nèi)成線性關(guān)系，檢測下限為35ng／

3、mL。5提出了一種基于生物催化沉積金屬納米粒子并結(jié)合金屬納米粒子繼續(xù)催化金屬沉積使它本身增大的信號連續(xù)放大電化學(xué)免疫分析法。我們先將羊抗人抗體吸附于聚苯乙烯微孔板上，在免疫反應(yīng)及催化沉積完成后，將微孔板內(nèi)的金屬溶解采用溶出伏安法測定溶解的金屬離子。由于這種方法結(jié)合了酶的催化作用及金屬納米粒子的催化作用進(jìn)行連續(xù)放大，分析的靈敏度得到了顯著地提高。溶出峰電流與人IgG的濃度在01～10ng／ml范圍內(nèi)成線性關(guān)系。顯然，這種這種利用了酶的高催

4、化活性及納米粒子催化作用的方法在提高免疫分析的靈敏度方面有著廣闊的應(yīng)用前景。6提出了一種以納米金作為電化學(xué)標(biāo)記物的免疫傳感器。在這種方法中，抗體首先通過被動吸附而固定于碳糊電極的表面，接著定量結(jié)合抗原和納米金標(biāo)記的抗體以形成免疫夾心復(fù)合物。為了檢測結(jié)合在電極表面的納米金的量，先以電化學(xué)法氧化納米金生成AuCl4離子，然后采用吸附伏安法定量檢測吸附在電極表面的AuCl4“離子。峰電流與抗原(人IgG)濃度在loN500ng／ml范圍內(nèi)成線

5、性關(guān)系，其檢測下限為40ng／ml。7除了對信號增強(qiáng)電化學(xué)免疫分析法本身的研究之外，我們運(yùn)用電化學(xué)及其它手段研究提出了一種新型、簡便、靈敏的熒光免疫分析方法。這種方法基于夾心異相免疫分析，并利用了納米顆粒標(biāo)記的抗體可以產(chǎn)生熒光淬滅的特性。羊抗人IgG首先吸附在微孔板上，接著人IgG被羊抗JklgG捕捉結(jié)合，再被納米金標(biāo)記的抗體夾心形成免疫復(fù)合物。然后加入氫氧化鈉和檸檬酸三鈉的混合溶液解離免疫復(fù)合物，獲得的含有納米金標(biāo)記抗體的溶液用于進(jìn)行