抗牛IFN-γ單克隆抗體的制備及ELISA檢測方法的初步建立.pdf

1、牛結(jié)核病(Bovine tuberculosis)是由牛型結(jié)核分枝桿菌(Mycobacteriumbovis,MB)和人型結(jié)核分枝桿菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)所引起的一種人畜共患慢性消耗性傳染病,可通過病畜傳染給人類或其他動物。為控制該病的發(fā)生和流行,必須加強(qiáng)對牛結(jié)核病診斷學(xué)研究,以便為控制和消滅牛結(jié)核病提供技術(shù)支持。
　　 近年來,隨著分子生物學(xué)技術(shù)和現(xiàn)代免疫學(xué)的快速發(fā)展,對于動物疾病的

2、診斷方法也多種多樣。其中,γ-干擾素(interferon-γ,IFN-γ)的免疫學(xué)檢測是在特異性抗IFN-γ鼠源單克隆抗體的基礎(chǔ)上建立。本研究利用大腸桿菌表達(dá)的牛IFN-γ(BovIFN-γ),制備抗牛IFN-γ的鼠源單克隆抗體及兔源多克隆抗體,建立可檢測牛IFN-γ的雙抗體夾心間接ELISA方法。
　　 以純化的大腸桿菌表達(dá)牛γ-干擾素融合蛋白(GST-BovIFN-γ)為免疫原免疫Balb/c小鼠,進(jìn)行細(xì)胞融合、間接ELI

3、SA篩選、有限稀釋法克隆/亞克隆篩選分泌抗牛γ-干擾素單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株,并通過間接ELISA對BovIFN-γ單克隆抗體效價(jià)、特異性、亞類及穩(wěn)定性進(jìn)行鑒定,建立理想的抗BoyIFN-γ單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株A12E9。
　　 利用純化的兔多克隆抗體作為包被抗體,制備的抗BovIFN-γ單克隆抗體作為夾心抗體,以及辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的山羊抗小鼠IgG作為酶標(biāo)抗體,建立雙抗夾心間接ELISA方法,檢測BovIFN