SPR生物傳感器用于檢測吲哚乙酸和脫落酸.pdf

1、3-吲哚乙酸（IAA）和脫落酸（ABA）是普遍存在的植物激素，在植物生長發(fā)育過程中起著重要的作用。IAA最基本的功能不但可以加速和調(diào)控植物的生長發(fā)育，而且還可以阻礙植物的生長和根、莖、組織建成的作用。ABA的基本作用是促進和抑制植物生長，促進葉子與果實的脫落，影響花期等作用。目前這兩種植物激素的檢測方法大都存在樣品前處理復(fù)雜，費時，成本高，重現(xiàn)性和選擇性差等缺點。因此，本研究采用了具有實時監(jiān)測、樣品無需預(yù)處理、快速靈敏檢測等優(yōu)點的表面等

2、離子體共振（SPR）生物傳感器檢測IAA和ABA這兩種植物激素。為了提高SPR傳感器的靈敏度，本文采用兩種方法：一種是將金/銀合金納米粒子作為敏化材料引入SPR生物傳感器中，另一種是通過加長檢測鏈的方式來提高SPR生物傳感器檢測的靈敏度。本文包括以下兩部分實驗內(nèi)容：
　?。?）兩種SPR生物傳感器的構(gòu)建以及對IAA的檢測：一種是傳統(tǒng)模式SPR生物傳感器（傳感器1），另一種是引入Au/Ag合金納米粒子作為增敏材料的SPR生物傳感器（

3、傳感器2）。首先用不同的物質(zhì)修飾SPR的芯片。傳感器1：先在裸金片上修飾MPA，再修飾蛋白A，蛋白A能與MPA末端的被EDC/NHS活化后的羧基結(jié)合使蛋白A修飾到芯片上，用鹽酸乙醇胺對芯片進行滅活，IAA抗體的非抗原結(jié)合位點能與蛋白A結(jié)合使IAA抗體修飾到芯片上，最后進行對IAA的檢測。傳感器2：先在裸金片上修飾HDT， Au/Ag合金納米粒子可與金硫鍵、金銀鍵結(jié)合從而使其修飾到芯片上，接下來在傳感器2上依次修飾MPA、蛋白A、IAA抗

4、體的方法與傳感器1相同。結(jié)果兩種傳感器均能成功的檢測IAA，傳感器1對IAA濃度為175~350μg/L所對應(yīng)的波數(shù)變化進行線性回歸分析，得到線性方程為y=-6.58+0.103 x，R2=0.994，檢測限為25μg/L（S/N=3）；傳感器2對IAA濃度為17.5~250μg/L所對應(yīng)的波數(shù)變化進行線性回歸分析，得到線性方程為y=4.27+0.104 x，R2=0.999，檢測限為2.2μg/L（S/N=3）。說明傳感器2中引入Au

5、/Ag合金納米粒子確實可以有效的提高檢測的靈敏度，此外本實驗所構(gòu)建的SPR生物傳感器具有良好的穩(wěn)定性，特異性及重現(xiàn)性。
　　（2）構(gòu)建兩種SPR生物傳感器并成功檢測ABA：一種是MPA構(gòu)建的SPR生物傳感器（傳感器1），另一種是巰基己酸構(gòu)建的SPR生物傳感器（傳感器2）。通過分子自組裝技術(shù)對SPR生物傳感器的芯片進行修飾。傳感器1依次修飾HDT、Au/Ag合金納米粒子、MPA、蛋白A、IAA抗體，最后對ABA進行檢測。傳感器2與傳

6、感器1的不同之處在于將傳感器1的MPA換成了巰基己酸，增長了3個碳鏈，通過加長檢測鏈的方法來提高 SPR生物傳感器的靈敏度。結(jié)果兩種 SPR生物傳感器均能成功的檢測ABA，傳感器1對ABA濃度為13.1~23.8μg/L所對應(yīng)的波數(shù)變化進行線性回歸分析，得線性方程為y=1.29+0.074 x，R2=0.995，檢測限為2.3μg/L（S/N=3）；傳感器2對ABA濃度為3.3~40μg/L所對應(yīng)的波數(shù)變化進行線性回歸分析，得線性方程為