非受體酪氨酸激酶c-Abl通過Cdc25C調(diào)控G2-M轉(zhuǎn)換的機理研究.pdf

1、非受體酪氨酸激酶c-Abl廣泛表達于各組織細胞中,通過相互作用及磷酸化修飾改變底物蛋白的生物活性,進而調(diào)控細胞的增殖與分化、細胞粘附遷移、細胞凋亡以及細胞的周期轉(zhuǎn)換等生命過程。磷酸酶Cdc25C是調(diào)控細胞周期G2/M期轉(zhuǎn)換的關(guān)鍵因子。在G2/M期階段,被Cdc25C去磷酸化激活的Cdk1/CyclinB復(fù)合體可同時反饋上調(diào)Cdc25C磷酸酶活性,這種正反饋信號放大效應(yīng)使大量的Cdk1/CyclinB復(fù)合體被激活,從而開啟M期的分裂進程。

2、我們前期研究發(fā)現(xiàn),在離子輻射應(yīng)激的條件下,c-Abl參與調(diào)控細胞周期G2/M期阻滯。由于此過程中Cdc25C激活Cdk1/CyclinB復(fù)合體的過程受阻,提示c-Abl激酶有可能通過Cdc25C調(diào)控G2/M轉(zhuǎn)換,并在細胞周期阻滯中發(fā)揮作用。盡管已有研究表明c-Abl參與調(diào)控細胞G1/S期的轉(zhuǎn)換,但c-Abl在細胞周期G2/M期轉(zhuǎn)換中的作用尚不明確。此外,c-Abl與Cdc25C之間的相互作用及調(diào)控關(guān)系也未見報道。
　　本研究通過一

3、系列免疫沉淀、免疫印跡、磷酸酶活性分析、激酶活性分析、細胞增殖活力分析以及細胞流式周期分析等實驗技術(shù),研究了c-Abl與Cdc25C的相互作用、c-Abl介導(dǎo)的Cdc25C酪氨酸磷酸化修飾以及c-Abl對Cdc25C活性調(diào)節(jié)的可能機理。研究發(fā)現(xiàn),c-Abl能夠通過其SH2、SH3結(jié)構(gòu)域與Cdc25C直接相互作用且可介導(dǎo)Cdc25C酪氨酸磷酸化。LC-MS/MS質(zhì)譜鑒定發(fā)現(xiàn)第165位酪氨酸(Y165)是Cdc25C主要酪氨酸磷酸化位點。體

4、外磷酸酶活性分析表明,c-Abl激酶介導(dǎo)的酪氨酸磷酸化可抑制Cdc25C的磷酸酶活性。失去磷酸化修飾的Cdc25CY165F突變體的S216位點磷酸化水平及與胞質(zhì)中14-3-3蛋白的結(jié)合能力顯著增加,提示c-Abl介導(dǎo)的酪氨酸磷酸化可調(diào)控Cdc25C入核。Cdc25C在細胞內(nèi)的穩(wěn)定性亦依賴c-Abl的激酶活性。離子輻射應(yīng)激條件下,c-Abl通過磷酸化Cdc25C促進細胞周期在G2/M期發(fā)生阻滯。
　　基于上述結(jié)果,我們提出c-Ab

5、l激酶在離子輻射應(yīng)激的條件下通過Cdc25C調(diào)控細胞周期G2/M期阻滯的可能機制。一方面,離子輻射應(yīng)激可促進激活的c-Abl激酶進入細胞核,直接介導(dǎo)核內(nèi)Cdc25C酪氨酸磷酸化進而抑制其磷酸酶活性;另一方面,由于輻射應(yīng)激后c-Abl大量入核,使胞質(zhì)中的Cdc25CY165位點不能被充分磷酸化,進而與14-3-3蛋白結(jié)合被滯留在胞質(zhì)中無法入核。上述兩方面的作用使核內(nèi)Cdc25C的水平和磷酸酶活性均顯著降低,無法去磷酸化激活Cdk1/Cyc