超臨界CO-,2-體系下固定化亞油酸異構(gòu)酶的催化反應(yīng).pdf

1、本文以實(shí)驗(yàn)室分離鑒定的一株植物乳桿菌Lactobacillusplantarum，LT2-6發(fā)酵產(chǎn)生的能將亞油酸(LinoleicAcid，LA)異構(gòu)化為共軛亞油酸(ConjugatedLinoleicAcid，CLA)的亞油酸異構(gòu)酶作為酶源，以提高酶的利用率、實(shí)現(xiàn)酶與脂溶性底物的均相傳質(zhì)反應(yīng)為目的，將固定化酶作為生物催化劑，以超臨界CO2(SupercriticalCarbondioxide，SCCO2)作為反應(yīng)介質(zhì)，對(duì)亞油酸異構(gòu)酶催

2、化異構(gòu)反應(yīng)性質(zhì)進(jìn)行了初步探討。 首先進(jìn)行了固定化方法和載體的篩選，固定化條件的確定，酶性質(zhì)的表征。得出：采用海藻酸鈣凝膠包埋法，海藻酸鈉濃度3％(w/v)，CaCl2濃度4％(w/v)，加酶量為1.2mL(總蛋白量為0.165mg)每10mL載體，固定化20h，酶活較高，具有高效的轉(zhuǎn)化能力；pH6.0～6.5范圍內(nèi)酶的存放穩(wěn)定性較好；固定化酶熱穩(wěn)定性溫度范圍有所增加；固定化酶反應(yīng)最適pH6.5，最適溫度35℃，最適CLA濃度20

3、μg/mL；固定化酶校正動(dòng)力學(xué)參數(shù)分別為Km’=23.95μmol/L，Vmax’=1.092μmol/h·mg；進(jìn)行5次循環(huán)反應(yīng)，確定pH6.5，30℃為固定化酶循環(huán)反應(yīng)生成CLA的有效pH值和有效溫度。以上的研究表明，海藻酸鈣包埋法固定化亞油酸異構(gòu)酶在合適的條件下酶活較高，固定化酶的質(zhì)量受海藻酸鈉濃度、固定化酶量、固定化時(shí)間以及CaCl2濃度的影響，由此制得的固定化酶的固定化率可達(dá)98.2％，其熱穩(wěn)定性、pH值穩(wěn)定性均高于游離酶，機(jī)

4、械強(qiáng)度較好，小球制作容易，并可重復(fù)使用。 SCCO2體系下，考察了壓力，溫度，作用時(shí)間，含水量，卸壓時(shí)間對(duì)凝膠顆粒完整率和酶的穩(wěn)定性影響。在不同條件下，影響因素作用的程度不同；快速卸壓會(huì)引起CO2相變甚至顆粒破裂，卸壓越快，海藻酸鈣膠體的完整率越低；估算底物在不同壓力下SCCO2的相對(duì)溶解度參數(shù)，證明SCCO2作為反應(yīng)介質(zhì)可行；優(yōu)化SCCO2體系下酶反應(yīng)條件為：壓力10MPa，溫度40℃，相對(duì)含水量70％，底物L(fēng)A與酶質(zhì)量比為0