補(bǔ)陽還五湯及其拆方干預(yù)大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷的療效及作用機(jī)制的初步研究.pdf

1、目的:
　　參照Longa線栓法復(fù)制大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷（Cerebral ischemia reperfusion injury， CIRI）模型。根據(jù) bederson評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分和TTC染色法測(cè)定梗死面積，評(píng)價(jià)補(bǔ)陽還五湯對(duì)局灶性腦缺血再灌注的藥效作用，同時(shí)使用Western blot分析法檢測(cè)大鼠腦梗死區(qū)細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3的表達(dá)水平。進(jìn)一步研究補(bǔ)陽還五湯君臣佐使拆方干預(yù)

2、大鼠腦缺血再灌注損傷的療效，初步嘗試闡述補(bǔ)陽還五湯中君臣佐使的地位。
　　方法:
　　SPF級(jí)成年SD大鼠，雄性，依照完全隨機(jī)的原則分為七組，即補(bǔ)陽還五湯組、君藥組、臣藥組、佐藥組、使藥組、假手術(shù)組、模型組，每組8只，適應(yīng)性飼養(yǎng)一周，術(shù)前禁食12h，自由飲水。術(shù)前30min開始灌胃給藥，缺血2h再灌注0h、12h、24h、48h、72h各給藥一次，并根據(jù) bederson評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)對(duì)最后一次灌藥后2h進(jìn)行神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分，并麻醉

3、處死取腦，采用TTC染色法測(cè)量腦梗死面積，利用western blot分析法測(cè)定大鼠腦組織梗死區(qū)Bcl-2、Bax、Caspase-3凋亡蛋白的表達(dá)水平。
　　結(jié)果:
　　1.依照Longa線栓法成功復(fù)制建立大鼠中動(dòng)脈栓塞（Middle cerebral artery occlusion， MCAO）缺血再灌注損傷模型，大腦中動(dòng)脈缺血再灌注術(shù)后大鼠，表現(xiàn)出明顯的神經(jīng)運(yùn)動(dòng)功能障礙，處死后，可明顯看到梗死部位腫脹，顏色變淺，顱底

4、未見出血，符合缺血再灌注損傷研究模型。
　　2.缺血再灌注72h后，與模型組比較，補(bǔ)陽還五湯組神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分明顯下降，梗死面積顯著縮小。說明補(bǔ)陽還五湯對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷有一定保護(hù)作用。
　　3.通過Western blot法分析缺血部位凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)水平，模型組大鼠Bcl-2蛋白表達(dá)量下降，Bax蛋白表達(dá)含量略有升高，而Bcl-2/Bax的比率顯著下降，Caspase-3的表達(dá)量顯著升高；補(bǔ)陽還五湯干預(yù)治療后，梗死區(qū)腦

5、組織中Bcl-2蛋白表達(dá)量升高明顯，Bax的蛋白表達(dá)顯著降低，且Bcl-2/Bax的比值顯著升高，Caspase-3的表達(dá)量降低。
　　4.依據(jù)Bederson神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分、TTC染色法和Western blot方法比較全方組、君藥組、臣藥組、佐藥組、使藥組、假手術(shù)組、模型組在神經(jīng)功能評(píng)分、梗死面積及凋亡蛋白表達(dá)量上的差異。經(jīng)神經(jīng)功能行為學(xué)評(píng)分結(jié)果顯示，補(bǔ)陽還五湯組、君藥組和使藥組神經(jīng)功能評(píng)分均顯著下降（P<0.05）。TTC染

6、色后補(bǔ)陽還五湯組、君藥組（黃芪）、使藥組（地龍）梗死面積縮??；而臣藥組（當(dāng)歸）、佐藥組（赤芍、川芎、桃仁、紅花）梗死面積縮小不明顯。WB分析結(jié)果顯示，與假手術(shù)組比較，MCAO組、臣藥組、佐藥組梗死區(qū)Bcl-2蛋白表達(dá)顯著下降（P<0.05）；與MCAO組比較，補(bǔ)陽還五湯組、君藥組、使藥組大鼠的腦梗死區(qū)的Bcl-2蛋白表達(dá)顯著上升（P<0.05）；與補(bǔ)陽還五湯組比較，臣藥組、佐藥組大鼠的腦梗死區(qū)的Bcl-2蛋白表達(dá)顯著下降了（P<0.05

7、）。梗死區(qū)Bax蛋白表達(dá)量與MCAO組比較，補(bǔ)陽還五湯組、君藥組、使藥組梗死區(qū)Bax蛋白的表達(dá)明顯降低（P<0.05）；與補(bǔ)陽還五湯比較，佐藥組梗死區(qū)Bax的表達(dá)相反卻是升高的（P<0.05）。與假手術(shù)組比，MCAO組、臣藥組和佐藥組梗死區(qū)Bcl-2/bax的比率明顯降低（P<0.05）；與MCAO組比較，補(bǔ)陽還五湯組、君藥組、使藥組梗死區(qū)Bcl-2/bax的比率明顯升高（P<0.05）；與補(bǔ)陽還五湯組比較，臣藥組和佐藥組梗死區(qū)Bcl-

8、2/bax的比率明顯降低（P<0.05）；假手術(shù)組與補(bǔ)陽還五湯組、君藥組、使藥組均沒有統(tǒng)計(jì)意義的差異（P>0.05）。對(duì)于梗死區(qū)Caspase-3蛋白表達(dá)，與假手術(shù)比較，MCAO組、臣藥組、佐藥組梗死區(qū)Caspase-3的表達(dá)量顯著升高（P<0.05）；與MCAO組比，補(bǔ)陽還五湯組、君藥組梗死區(qū)Caspase-3的表達(dá)量顯著降低（P<0.05）；與補(bǔ)陽還五湯組比較，臣藥組和佐藥組梗死區(qū)Caspase-3的表達(dá)量顯著升高（P<0.05）；