大葉蛇葡萄總黃酮提取物抗腫瘤作用及其機(jī)制研究.pdf

1、大葉蛇葡萄Ampelopsis megalophylla Diels et. Gilg為葡萄科蛇葡萄屬植物，其藥用部位是葉及嫩莖。味酸澀、性平，具有清熱涼血等功效。主要分布于我國湖北、陜西、云南等地，是湖北恩施地區(qū)的民間藥用植物，曾收載于《湖北中草藥志》。
　　課題組前期經(jīng)滲漉法得到了大葉蛇葡萄總黃酮提取物。本實(shí)驗(yàn)采用MTT法對(duì)大葉蛇葡萄總黃酮提取物進(jìn)行了體外抗腫瘤活性的研究。結(jié)果表明其對(duì)人宮頸癌Hela、肺癌A549、乳腺癌MC

2、F-7、肝癌HepG2、卵巢癌A2780及結(jié)腸癌SW620六種腫瘤細(xì)胞均有一定的增殖抑制作用，并呈現(xiàn)一定的濃度、時(shí)間依賴性。其中較為敏感的細(xì)胞株有MCF-7、A2780、和SW620，IC50分別為28.47、18.41和21.85μg·mL-1。
　　在此基礎(chǔ)上，以人乳腺癌MCF-7細(xì)胞為模型，運(yùn)用Hoechst33258熒光染色法、PI單染法及AnnexinV-FITC/PI雙標(biāo)記法進(jìn)一步研究大葉蛇葡萄總黃酮提取物體外抗腫瘤作

3、用，同時(shí)運(yùn)用Rh-123染色法及蛋白免疫印跡法對(duì)其誘導(dǎo)MCF-7細(xì)胞凋亡的機(jī)制進(jìn)行了探討。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，大葉蛇葡萄總黃酮提取物可誘導(dǎo)MCF-7細(xì)胞凋亡，33258染色可在熒光倒置顯微鏡下觀察到凋亡小體，雙染法顯示細(xì)胞凋亡率呈現(xiàn)一定的濃度依賴性，這二者分別從定性和定量?jī)蓚€(gè)方面說明藥物誘導(dǎo)細(xì)胞產(chǎn)生凋亡；PI法顯示藥物使MCF-7細(xì)胞阻滯在G2/M期。線粒體檢測(cè)顯示細(xì)胞線粒體膜電位降低，WB結(jié)果顯示caspase8、Bax、cytc、Apaf