冷蒿化學(xué)成分研究及初步藥理活性篩選.pdf

1、冷蒿(Artemisia frigida)別名小白蒿，蒙名阿給，為菊科（Compositae）蒿屬小半灌木，具有蒿類(lèi)的芳香氣味，主要分布于我國(guó)內(nèi)蒙古省，此外，吉林、河北、遼寧、青海、陜西、新疆、甘肅、寧夏、以及西南高山地區(qū)均有分布，蒙古、西伯利亞和北美也有分布。其主要生長(zhǎng)于草原與荒漠帶，多生長(zhǎng)于沙質(zhì)或石質(zhì)土壤中。味苦，具有止血、消腫、制伏癰疽等功能，主治各種出血、關(guān)節(jié)腫脹、腎熱、月經(jīng)不調(diào)、瘡癰。目前，關(guān)于冷蒿的研究中，已有文獻(xiàn)表明其主要

2、成分為倍半萜、黃酮、香豆素類(lèi)化合物，但是關(guān)于冷蒿更深入的研究還寥寥無(wú)幾。本課題組一直進(jìn)行著冷蒿的相關(guān)研究，前期已在該植物中發(fā)現(xiàn)了幾個(gè)具有新穎結(jié)構(gòu)的倍半萜類(lèi)化合物，并評(píng)價(jià)了它們的腫瘤細(xì)胞增殖抑制活性。為了更有效的開(kāi)發(fā)該植物的藥用價(jià)值，課題組對(duì)冷蒿全草進(jìn)行更深一步的研究，對(duì)其二氯甲烷、乙酸乙酯部分的化學(xué)成分進(jìn)行系統(tǒng)的分離純化，并對(duì)得到的單體物質(zhì)進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定和活性篩選。
　　目的：本研究以冷蒿全草為研究對(duì)象，通過(guò)柱色譜、薄層色譜、制備高

3、效液相色譜、制備薄層色譜等色譜學(xué)方法對(duì)其化學(xué)成分進(jìn)行系統(tǒng)的分離純化，建立有效的分離純化方法，得到單體化合物。應(yīng)用UV、MS以及1H-NMR、13C-NMR、1H-1H COSY、HSQC、HMBC、NOESY等波譜學(xué)方法對(duì)單體化合物進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定。再對(duì)單體化合物進(jìn)行活性篩選，以期尋找到具有較好活性的單體化合物，為新藥研發(fā)提供基礎(chǔ)研究。
　　方法：自然干燥的冷蒿全草14 kg經(jīng)適當(dāng)粉碎后，用95％乙醇加熱回流提取三次，濃縮后得到浸膏約

4、2079.6 g，再用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯依次萃取，濃縮后得浸膏石油醚部分449.2 g，二氯甲烷部分87.6 g，乙酸乙酯部分132.4 g。采用正反相硅膠柱色譜法、聚酰胺柱色譜法、Sephadex LH-20色譜法、制備薄層色譜法及高效液相色譜法對(duì)二氯甲烷和乙酸乙酯部分的化學(xué)成分進(jìn)行分離純化，得到單體化合物，采用UV、MS、1H-NMR、13C-NMR、1H-1H COSY、HSQC、HMBC、NOESY等現(xiàn)代光譜、波譜技術(shù)進(jìn)

5、行結(jié)構(gòu)鑒定，最后進(jìn)行活性篩選。
　　結(jié)果：通過(guò)對(duì)冷蒿全草化學(xué)成分的分離純化，經(jīng)過(guò)鑒定得到26個(gè)單體化合物，包括13個(gè)黃酮類(lèi)化合物，10個(gè)倍半萜類(lèi)化合物，1個(gè)香豆素類(lèi)化合物，1個(gè)苯乙酮類(lèi)化合物，1個(gè)苯烯酸類(lèi)化合物。結(jié)果如下：柳穿魚(yú)黃素（1），棕矢車(chē)菊素（2），金圣草黃素（3），麥黃酮（4），3-羰基-吉瑪-1(10),11(13)-二烯-6α,12-內(nèi)酯（5），蓍素（6），1,10β-環(huán)氧蓍素（7），濱蒿內(nèi)酯（8），4-羥基苯乙酮（

6、9），貓眼草黃素（10），棕鱗矢車(chē)菊黃酮素（11），11α,13-二氫魃蒿內(nèi)酯（12），chrysanthemin A（13），異澤蘭黃素（14），澤蘭黃素（15），南艾蒿烯內(nèi)酯（16），6-甲氧基麥黃酮（17）， hanphyllin（18），薊黃素（19），利得亭（20），desacetylmatricarin（21）， subchrysine（22），木犀草素（23），咖啡酸（24），藿香苷（25），田薊苷（26）。
　　活

7、性篩選發(fā)現(xiàn)化合物棕矢車(chē)菊素（2）和澤蘭黃素（15）在濃度為20μg/mL時(shí)有較弱的PPARγ（過(guò)氧化物酶體增長(zhǎng)因子活化受體γ）激動(dòng)活性，激動(dòng)倍數(shù)分別為2.09和2.50?；衔锪~(yú)黃素（1）和金圣草黃素（3）對(duì)PTP1B（蛋白質(zhì)酪氨酸磷酸酶1B）有中等強(qiáng)度的抑制作用，其IC50值分別為7.42μg/mL和3.95μg/mL。
　　結(jié)論：對(duì)冷蒿全草二氯甲烷和乙酸乙酯部位的化學(xué)成分進(jìn)行了系統(tǒng)分離鑒定了26個(gè)化合物的結(jié)構(gòu)，其中從該屬首

8、次分離得到化合物為3-羰基-吉瑪-1(10),11(13)-二烯-6α,12-內(nèi)酯（5），1,10β-環(huán)氧蓍素（7），棕鱗矢車(chē)菊黃酮素（11），hanphyllin（18），藿香苷（25），田薊苷（26）；從該植物首次分離得到的化合物為貓眼草黃素（10），11α,13-二氫魃蒿內(nèi)酯（12）， chrysanthemin A（13），南艾蒿烯內(nèi)酯（16），6-甲氧基麥黃酮（17）， subchrysine（22）?；衔镒厥杠?chē)菊素（2）和