地耳草化學(xué)成分及藥理活性研究.pdf

1、地耳草（Hypericum japonicum Thunb. ex Murray），屬于藤黃科（Guttiferae）金絲桃屬（Hypericum）的一種多年生草本植物，又名田基黃、小元寶草、四方草、千重樓（浙江）等，廣泛分布于山東、遼寧以及長江以南等各個(gè)省區(qū)。在我國民間，地耳草的全草被用于清熱解毒、止血消腫和治療各種急慢性以及傳染性肝炎、瀉痢、胃腸功能紊亂和內(nèi)出血等。在歐美等地區(qū)也有民間藥用記載。地耳草的萃取液，也叫田基黃，具有抑菌、

2、保肝護(hù)肝、抗腫瘤和預(yù)防心血管疾病等療效，目前已有針劑應(yīng)用于臨床治療急、慢性肝炎。本課題采用乙醇溶劑提取法，分別對湖北蘄春大別山地區(qū)和江西廬山地區(qū)產(chǎn)地耳草地上莖葉部分進(jìn)行化學(xué)成分和藥理活性研究。
　　采用了正相硅膠層析柱、ODS反相色譜柱、葡聚糖凝膠Sephadex LH-20、半制備HPLC和半制備手性拆分等分離手段和方法，綜合運(yùn)用了1D&2D NMR、HRESIMS、X-ray單晶衍射、IR和UV等多種現(xiàn)代波譜技術(shù)，并通過改良M

3、osher’s手性反應(yīng)和Rh鹽誘導(dǎo) ECD效應(yīng)等化學(xué)反應(yīng)方法，以及含時(shí)密度泛函理論（TD-DFT）計(jì)算 ECD和量子化學(xué)理論計(jì)算并預(yù)測13C NMR化學(xué)位移等物理化學(xué)手段，鑒定了68個(gè)化合物的結(jié)構(gòu)，其中有34個(gè)新化合物。這34個(gè)新化合物中：（1）有10個(gè)屬于綿馬酸駢合倍半萜類衍生物（其中有3對對映異構(gòu)體和1對差向異構(gòu)體），具有6/6/11，6/6/7/5和6/6/10三種新穎骨架，而且，這也是首次從藤黃科植物里發(fā)現(xiàn)具有這種類型的化合物，

4、豐富了藤黃科植物次生代謝產(chǎn)物的類型；（2）有16個(gè)屬于間苯三酚單萜類衍生物（為8對對映異構(gòu)體），其中有3對化合物具有比較新穎的2-oxabicyclo[3.3.1]nonane，pyrano[3,2-b]pyran和benzo[b]cyclopenta[e]oxepine環(huán)系；（3）有4個(gè)化合物屬于螺酮縮醇雜萜類化合物（為2對對映異構(gòu)體），具有比較新穎的1,6-dioxaspiro[4.4]non-2-en-4-one環(huán)系；（4）有1個(gè)

5、為降倍半萜類；（5）有2個(gè)為新吡喃酮類化合物；（6）有1個(gè)為新木質(zhì)素類化合物。
　　我們對這34個(gè)新化合物進(jìn)行了體外細(xì)胞毒活性（包括五種常見的人類腫瘤細(xì)胞株：SW480、MCF-7、A-549、SMMC-7721和HL-60；一種非腫瘤細(xì)胞株：BEAS-2B）抑制β淀粉樣蛋白肽前體蛋白裂解酶（β-site amyloid precursor protein cleaving enzyme1, BACE1）活性、NO生成抑制活性、對

6、誘導(dǎo)期Epstein–Barr病毒（Epstein–Barr virus, EBV）的DNA復(fù)制的抑制和抗卡波氏肉瘤相關(guān)病毒（kaposi’s sarcoma associated herpesvirus, KSHV）感染等多種生物活性篩選，其中間苯三酚倍半萜類化合物表現(xiàn)為普遍具有潛在的抗EBV活性，而且化合物3（EC50:0.57μM;SI：52.63）和化合物7（EC50:0.49μM；SI:106.78）表現(xiàn)出比目前最好的抗EBV

7、藥物更昔洛韋（EC50:2.86μM;SI:104.50）更強(qiáng)的活性，這也是首次發(fā)現(xiàn)間苯三酚倍半萜類衍生物具有針對 EBV在裂解期進(jìn)行DNA復(fù)制的抑制作用。而且，我們還初步探討了這10種間苯三酚倍半萜衍生物在抗EBV活性中所表現(xiàn)出來的構(gòu)效關(guān)系，結(jié)論是：光學(xué)活性為左旋體、具有綿馬酸結(jié)構(gòu)、倍半萜部分為大環(huán)且沒有環(huán)外烯鍵（?5,14），而且綿馬酸部分以C-5'-O-C-1聯(lián)接方式駢合倍半萜部分的間苯三酚倍半萜衍生物，可能具有較高的抗 EBV活

8、性。此外，間苯三酚單萜類化合物表現(xiàn)為普遍具有潛在的抗KSHV活性，其中化合物28（EC50:8.30μM;SI:23.49）和化合物34（EC50:4.90μM;SI:25.70）對于研發(fā)針對KSHV裂解期復(fù)制的抗感染藥物具有相當(dāng)?shù)拈_發(fā)價(jià)值。
　　藤黃科植物的次生代謝產(chǎn)物絕大多數(shù)為間苯三酚衍生物，而本課題分離鑒定的綿馬酸駢合倍半萜型的間苯三酚衍生物，屬三類新骨架化合物，在藤黃科植物里屬首例發(fā)現(xiàn)。而且，我們還首次對間苯三酚衍生物進(jìn)行