四種乳源性益生菌對免疫低下Balb-c小鼠的免疫調節(jié)作用及機制研究.pdf

1、目的：在課題組的前期研究中發(fā)現新疆傳統發(fā)酵駝乳（shubat）具有免疫調節(jié)作用，從中分離出的免疫活性肽能促進小鼠脾淋巴細胞增殖，使NF-κB、IL-6的mRNA相對表達量降低，IL-12、IL-23的mRNA相對表達量增加，可以促進小鼠脾淋巴細胞免疫調節(jié)作用，該作用可能與調節(jié)Th1/Th2平衡有關。此外，發(fā)酵乳品中含有多種益生菌，本研究欲對新疆傳統發(fā)酵駝乳發(fā)酵菌和乳酪乳清中分離出的4種可能具有免疫調節(jié)作用的益生菌進行了研究，并且就其免疫

2、調節(jié)作用機制進行了研究。
　　方法：⑴將四種益生菌進行凍干粉活化及擴大化培養(yǎng)，制備菌懸液備用；⑵連續(xù)三天腹腔注射80mg·kg-1環(huán)磷酰胺制造免疫低下小鼠模型；⑶小鼠隨機分為十一個組，分別給予高、低劑量的馬乳酒樣乳桿菌，東方伊薩酵母菌，高加索酸奶乳桿菌以及戊糖乳桿菌菌懸液，陽性藥組給予高劑量雙歧桿菌菌懸液，正常組與模型組給予相同體積生理鹽水；⑷干預4周后取脾臟，胸腺，結腸計算臟器指數，CCK-8法檢測脾淋巴細胞活力，全自動生化分析

3、儀檢測血清生化指標水平，采用流式CBA試劑盒檢測血清細胞因子含量；⑸提取小鼠脾臟RNA，用實時熒光定量PCR（RT-PCR）技術檢測小鼠脾臟細胞中IFN-γ、IL-4、IL-10、MyD88、TLR-7的mRNA的相對表達量，探討4種益生菌對免疫低下小鼠的免疫調節(jié)作用及其作用的信號通路。
　　結果：①干預一周后，模型組小鼠體重顯著降低（P＜0.05），四種益生菌組小鼠體重差異具有顯著性；②四種益生菌組的脾臟和胸腺指數均顯著增加（P

4、＜0.01），但對結腸指數的影響不具有顯著差異；③模型組脾臟淋巴細胞活力顯著下降（P＜0.01），四種益生菌組脾淋巴細胞活力顯著升高（P＜0.01）；④血清生化檢測結果顯示，四種益生菌能夠不同程度降低免疫低下小鼠AST，ALT以及UREA水平，差異具有顯著性（P＜0.05）。但是對CREA水平無顯著差異；⑤血清細胞因子檢測顯示：與正常組相比，模型組IL-2顯著下降（P＜0.05），IFN-γ也出現顯著下降（P＜0.01），IL-4和IL

5、-10顯著升高（P＜0.01）。與模型組相比，陽性藥組可使小鼠血清中IL-2，IFN-γ明顯升高，IL-10顯著降低。益生菌組均能使IL-2，IFN-γ顯著升高，IL-6，IL-10顯著降低，使血清IL-17A水平降低（P＜0.05）；⑥信號通路研究結果顯示：通過RT-PCR相對定量檢測發(fā)現，與正常組相比，模型組的IFN-γ、IL-4、IL-10、MyD88及TLR-7均有顯著升高（P＜0.05）；與模型組相比，益生菌組這五組基因均有顯