白藜蘆醇通過SIRT1翻譯后修飾PI3K-AKT-DLC1抑制肝癌細胞增殖和遷移的研究.pdf

1、肝細胞肝癌是常見的惡性腫瘤之一,在我國具有較高的死亡率。雖然化療作為肝癌治療重要的一部分,但目前臨床上廣泛使用的化療藥物療效有限，且毒性作用較大，經(jīng)幾次應(yīng)用后還會發(fā)生耐藥現(xiàn)象。近年來，采用天然植物的提取物探討對惡性腫瘤的治療引起了人們的關(guān)注。白藜蘆醇化學(xué)名為芪三酚，是一種存在于多種植物中非黃酮多酚類化合物，除具有防治心血管疾病、調(diào)節(jié)免疫、抗炎癥、抗衰老等作用外，其抗腫瘤活性越來越得到關(guān)注。本文探究了白藜蘆醇對于三種肝癌細胞系HepG2、

2、Be l-7402和SM MC-7721的影響及潛在的作用機制。用EdU摻入法檢測白藜蘆醇對細胞增殖的影響，發(fā)現(xiàn)100?M白藜蘆醇處理肝癌細胞24h后顯著抑制了肝癌細胞的增殖作用，而在相同條件下白藜蘆醇對正常肝細胞系HL-7702的增殖作用抑制不明顯。細胞凋亡是一種由基因控制機體自發(fā)的死亡過程，在腫瘤細胞中不僅細胞增殖失去控制，其凋亡能力也出現(xiàn)失衡，誘導(dǎo)細胞凋亡是許多抗腫瘤藥物的發(fā)揮作用的機制之一。
　　本研究用TUNEL法檢測白

3、藜蘆醇對肝癌細胞凋亡的影響，結(jié)果顯示經(jīng)白藜蘆醇處理后HepG2、Be l-7402和SMMC-7721細胞凋亡率分別由4±0.83％增加到13±1.32%，3±0.78%增加到14±0.72%，5±0.33%增加到16±1.12%，遠高于對照組的細胞凋亡率。進一步檢測凋亡相關(guān)蛋白的變化結(jié)果顯示白藜蘆醇上調(diào)了肝癌細胞系中Ba x和c lea ved-PARP蛋白的表達，同時下調(diào)了Bcl-2、casp ase-3、caspase-7和PAR

4、P蛋白的表達。腫瘤細胞中由于抑癌基因和原癌基因發(fā)生了突變，導(dǎo)致信號通路發(fā)生異常，其中PI3K/AKT信號通路在多種癌細胞中異常持續(xù)激活，不斷發(fā)揮抗凋亡的作用。本實驗中白藜蘆醇抑制了HepG2細胞PI3K/AKT信號通路中的p-PI3K、p-AKT以及下游的p-FoxO3a的表達水平。SIRT1作為腫瘤發(fā)展過程中一個關(guān)鍵性的調(diào)節(jié)因子，在Hep G2細胞中白藜蘆醇上調(diào)了SIRT1的蛋白表達和酶活力，并減少SIRT1下游靶分子FoxO1的乙酰

5、化水平。為了探究SIRT1在PI3K/AKT信號通路中的作用，我們使用SIRT1特異性的抑制劑EX527抑制其酶活后，發(fā)現(xiàn)p-PI3K、p-AKT的蛋白表達水平又增加了，這就說明白藜蘆醇通過激活SIRT1的活性來抑制PI3K/AK T信號通路。腫瘤抑制基因DLC1不僅在肝癌中表達缺失，而且在人類多種惡性腫瘤中也表達低下甚至缺失，它可通過其RhoGAP結(jié)構(gòu)域調(diào)控細胞增殖、細胞骨架組裝、黏著斑組裝等多種細胞進程，同時DLC1的翻譯后修飾作用

6、也會影響其發(fā)揮抑癌作用。我們發(fā)現(xiàn)白藜蘆醇顯著增加了肝癌細胞系中DLC1的表達水平并且抑制了HepG2細胞的遷移作用，用免疫共沉淀實驗探究AK T對DLC1的作用發(fā)現(xiàn)DLC1在一定程度上作為 AK T下游分子被磷酸化，而磷酸化后 DLC1功能發(fā)生了哪些改變還需要進一步的研究。結(jié)果顯示：白藜蘆醇通過上調(diào)SIRT1的蛋白水平和其酶活性，調(diào)節(jié)PI3K/AKT信號通路，減少p-PI3K、p-AKT、p-FoxO3a和Ac-FoxO1的表達水平，增