MicroRNA-182在IgA腎病中的表達及臨床意義.pdf

1、慢性腎臟病（CKD）在我國的發(fā)病率高達10％～13%，若不嚴格控制，部分患者終將進展至完全依靠腎臟替代治療的階段，給個人及國家產(chǎn)生巨大的經(jīng)濟負擔。CKD包括一系列原發(fā)性和繼發(fā)性腎臟疾病。IgA腎病是我國最常見的原發(fā)性腎小球疾病，臨床表現(xiàn)多樣，以血尿和（或）蛋白尿為主，同時伴有不同程度的高血壓及腎功能減退。在我國，大約有25%～50%的IgAN患者在確診10～20年內(nèi)可進展至終末期腎病，是我國青中年尿毒癥患者最常見的原發(fā)疾病。臨床確診Ig

2、AN的金標準為腎活檢，然而腎穿刺作為一項有創(chuàng)檢查，存在出血、感染等風險，還對患者的身體狀況有嚴格要求。對于IgAN患者而言，重復腎穿刺的可能性很小。這在很大程度上限制了對疾病病情的長期監(jiān)測和后續(xù)治療效果及預后的評估。IgAN病理機制復雜，研究至今仍不甚清楚，也無特異性的治療手段。腎臟工作者們一直致力于尋找高度靈敏特異的無創(chuàng)性分子標記物，作為IgAN病情監(jiān)測、治療效果及預后評估判斷的指標。
　　由于分子生物學迅猛發(fā)展，越來越多的科研

3、人員將目光積聚在尋找基因水平的疾病標志物。MicroRNA是近年來發(fā)現(xiàn)的一種廣泛存在于生物體的內(nèi)源性非編碼小分子RNA，通過與靶信使特異性結(jié)合抑制轉(zhuǎn)錄后基因水平的表達而發(fā)揮作用。查看既往文獻發(fā)現(xiàn)，miRNA的研究多與腫瘤相關(guān)，主要參與腫瘤細胞的生長分化、侵襲轉(zhuǎn)移以及化療藥物耐藥性等方面。重要的是，不同于蛋白性質(zhì)的分子，miRNA在機體的表達恒定，不易受外界因素干擾而變化，因此具有成為疾病分子標記物的潛能。
　　我們課題組前期通過基

4、因芯片篩選出差異性表達明顯的miRNA-182。miR-182同時兼具抑癌及促癌的作用，主要以促進腫瘤細胞發(fā)生發(fā)展、氧化應(yīng)激以及EMT等病理生理過程。miRNA在腎臟疾病領(lǐng)域的研究較多，然而多為單一的檢測腎組織或血清或尿液中的表達，特異性不高。本課題首次通過同時檢測IgAN患者腎組織、血清及尿液中miR-182的表達，并分析其臨床意義，期望能找到一種用于IgAN病情監(jiān)測、指導治療、評估預后的新型分子標記物。我們圍繞上述問題進行了本課題研

5、究。
　　目的：
　　1.觀察miR-182在不同慢性腎臟疾病腎組織中的表達變化；
　　2.觀察miR-182在IgAN患者腎組織、血清及尿液中的表達變化，并探討其臨床意義；
　　3.通過動物及細胞實驗驗證miR-182的致細胞表型轉(zhuǎn)化和腎臟纖維化作用。
　　方法：
　　1.收集不同慢性腎臟疾病的腎組織，提取RNA，PCR檢測miR-182的表達；
　　2.收集IgAN患者的腎組織、血清及尿液，

6、提取RNA并用PCR檢測miR-182的表達，統(tǒng)計分析miR-182與IgAN臨床及病理指標之間的關(guān)系；同時隨訪患者，分析血清中miR-182表達變化對IgAN預后的影響；
　　3.構(gòu)建SD大鼠的UUO模型，取不同時間段腎組織檢測miR-182的表達；低氧和TGF-β刺激HK-2細胞不同時間段后檢測miR-182表達。
　　結(jié)果：
　　1.與正常腎組織相比，miR-182在IgAN、HSPN、MN、FSGS等腎臟疾病中

7、表達升高，差異有統(tǒng)計學意義；
　　2.IgAN患者腎組織、血清和尿液中miR-182表達顯著高于對照組。ROC曲線分析腎組織、血清及尿液中miR-182對IgAN診斷效能的敏感性分別是63.0%、72.1%、66.7%，特異性分別是74.1%、75.5%、81.1%，非參數(shù)檢驗發(fā)現(xiàn)腎組織、血清、尿液中miR-182表達與患者病理指標（腎小球硬化、腎小管萎縮、腎間質(zhì)纖維化）密切相關(guān)。相關(guān)性分析腎組織、血清及尿液中miR-182與Le

8、e’s分級呈正相關(guān)（r值分別為0.5128、0.6520和0.6956），與eGFR呈負相關(guān)（r值分別為-0.4750、-0.6107和-0.6082）。生存分析發(fā)現(xiàn)miR-182對患者的預后有一定的影響；
　　3.miR-182在構(gòu)建成功的UUO動物模型、低氧和TGF-β刺激的HK-2細胞中表達均明顯升高，差異有統(tǒng)計學意義。
　　結(jié)論：
　　1.miR-182在不同慢性腎臟病的腎組織中表達明顯升高，說明miR-182

9、可能與慢性腎臟病的某一共同病理改變有關(guān)；
　　2.IgAN患者腎組織、血清及尿液中miR-182的表達變化與Lee’s分級正相關(guān)，與eGFR負相關(guān)，且血清中高表達miR-182的患者預后明顯差于低表達患者，說明動態(tài)監(jiān)測miR-182變化可反映IgAN的病情變化、評估治療效果和預后；
　　3.在腎臟纖維化模型以及導致細胞表型轉(zhuǎn)換的實驗中，miR-182表達均明顯增高，說明miR-182存在致腎臟纖維化的風險，然而具體的作用機制

10、仍需進一步研究。
　　小結(jié)：本課題通過檢測IgAN患者腎組織、血清及尿液中miR-182的表達變化，結(jié)合患者臨床及病理指標進行統(tǒng)計學分析，發(fā)現(xiàn)miR-182具有如下作用：
　　1.IgAN患者腎組織、血清及尿液中miR-182較正常對照均明顯升高；
　　2.腎組織、血清及尿液中miR-182的動態(tài)變化可以反映IgAN患者腎臟功能進展情況；
　　3.生存分析發(fā)現(xiàn)血清中miR-182可以評估IgAN患者的預后，可以作