尿酸對(duì)人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化過(guò)程中Wnt信號(hào)通路的影響.pdf

1、目的：探討不同濃度尿酸對(duì)人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（hBMSCs）成骨細(xì)胞分化過(guò)程中對(duì)Wnt/β-catenin信號(hào)通路相關(guān)基因表達(dá)的影響。
　　方法：采用全骨髓貼壁法體外分離培養(yǎng)健康成年人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，培養(yǎng)至第3代時(shí)選取生長(zhǎng)狀態(tài)良好的hBMSC作為研究對(duì)象。實(shí)驗(yàn)分為5組，為空白對(duì)照組及用含不同濃度尿酸(0，140，280，560μmol/L)的成骨誘導(dǎo)液進(jìn)行成骨向誘導(dǎo)分化培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)組，倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)，于分化培養(yǎng)的第7天進(jìn)行

2、細(xì)胞堿性磷酸酶成骨鑒定染色及檢測(cè)細(xì)胞成骨分化過(guò)程中堿性磷酸酶活性，第3天及第7天采用CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞增殖能力，最后于第10天檢測(cè)利用熒光定量PCR法檢測(cè)各組細(xì)胞中Wnt信號(hào)通路中Wnt-3α，β-catenin mRNA的表達(dá)，結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　結(jié)果：倒置顯微鏡下觀察可見(jiàn)大量貼壁的細(xì)胞團(tuán)簇，形態(tài)多呈紡錘形、梭形，第7天左右可見(jiàn)已全部貼壁，呈典型的集落樣生長(zhǎng)，各實(shí)驗(yàn)組組細(xì)胞堿性磷酸酶染色為陽(yáng)性，且隨尿酸濃度增高，染色依次