程序性細(xì)胞死亡因子-1在慢性HBV感染中的作用.pdf

1、背景:乙型肝炎發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，受病毒、宿主及二者相互作用的影響，病毒方面包括病毒蛋白、基因型等，而宿主方面的則主要包括宿主遺傳背景、免疫狀態(tài)因素等，宿主與病毒因素間平衡是影響疾病進(jìn)展與轉(zhuǎn)歸的核心環(huán)節(jié)。核苷（酸）類似物(Nucleoside/Nucleotide analogues，NAs)是一類口服抗乙型肝炎病毒（Hepatitis B virus，HBV）藥物，主要作用機(jī)制是其進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)首先成為三磷酸化合物，通過與底物的競爭，抑制病毒的

2、聚合酶或反轉(zhuǎn)錄酶，終止HBV DNA鏈的延長。近來研究表明，NAs可能還具有免疫調(diào)節(jié)作用。對服用NAs抗病毒治療的慢性乙型病毒性肝炎（Chronic hepatitis B，CHB）患者的研究表明:NAs治療可以調(diào)節(jié)Th1/Th2平衡，改善Treg細(xì)胞增殖，促進(jìn)機(jī)體免疫功能的增強(qiáng)或恢復(fù)。臨床中NAs抗HBV感染的療效具有個體差異性，其影響因素除病毒基因型外，宿主的遺傳背景也具有很大作用，而宿主的遺傳背景主要由單核苷酸多態(tài)性（Single

3、 nucleotide polymorphism，SNP）決定。SNP指由單個核苷酸A、T、C或G的改變而引起的DNA序列的改變，從而造成的不同物種間或人體內(nèi)染色體基因組的多樣性。SNP構(gòu)成人類基因組90％以上的變異，廣泛用于連鎖分析與基因定位、疾病易感性、群體遺傳學(xué)與進(jìn)化生物學(xué)、藥物基因組、環(huán)境基因組學(xué)等研究。目前文獻(xiàn)報道的與HBV感染預(yù)后相關(guān)的SNP包括:人類白細(xì)胞抗原結(jié)構(gòu)區(qū)的HLA DRBA*1302、MHC-Ⅰ、Ⅱ位點(diǎn)，非人類白

4、細(xì)胞抗原結(jié)構(gòu)區(qū)的腫瘤壞死因子-α、干擾素-γ、雌激素受體-α、甘露糖結(jié)合蛋白、維生素D受體、白介素-10、干擾素γ誘導(dǎo)的蛋白-10、程序性細(xì)胞死亡因子-1等基因。程序性細(xì)胞死亡因子-1（Programmed celll death-1，PD-1）屬于CD28家族和Ig超家族，是一種相對分子質(zhì)量約50-55KDa的Ⅰ型跨膜蛋白，表達(dá)于活化的CD4+和CD8+T細(xì)胞、B細(xì)胞和骨髓細(xì)胞，在未活化的淋巴細(xì)胞不表達(dá)。慢性HBV感染時，肝細(xì)胞表面過

5、度表達(dá)PD-1的配體PD-L1，通過PD-1/PD-L1信號通路抑制CD8+T細(xì)胞的表達(dá)，T細(xì)胞耗竭導(dǎo)致IFN-γ、TNF-α等抗病毒細(xì)胞因子的表達(dá)減少，病毒持續(xù)存在。PD-1的不同等位基因的表達(dá)在HBV感染患者、肝硬化患者和健康人群中不同，且其內(nèi)含子的SNP與外周血病毒載量相關(guān)。最近研究發(fā)現(xiàn)在HBV和HIV/HBV感染的CHB患者中，外周血Treg細(xì)胞的擴(kuò)增與HBV DNA載量相關(guān)且表現(xiàn)為抑制HBV特異性免疫反應(yīng);阿德福韋酯治療可阻斷

6、PD-1受體表達(dá)，抑制HBV復(fù)制，減少Treg細(xì)胞數(shù)量和功能，顯著提高HBV特異性CD8+T效應(yīng)細(xì)胞，從而增強(qiáng)免疫應(yīng)答。目前關(guān)于PD-1在HBV慢性感染中的作用研究尚未十分明確，PD-1單核苷酸多態(tài)性與HBV感染自發(fā)清除和抗HBV療效的研究較少，且研究結(jié)果不一致，NAs抗病毒治療與PD-1及其相關(guān)因子是否存在關(guān)聯(lián)，是否能夠影響宿主的免疫功能尚存在爭議。
　　目的:本研究通過測定HBV感染自發(fā)清除者、CHB患者（包括NAs治療者和未

7、抗HBV者）及HBV相關(guān)慢加急性肝衰竭(Acute-on-chronicliver failure，ACLF)患者血清及肝組織表達(dá)PD-1的水平，探討不同HBV感染階段PD-1的水平的變化，評價NAs對PD-1表達(dá)水平的影響，分析血清PD-1與慢性HBV感染者臨床生化指標(biāo)及病毒載量的相關(guān)性，探討PD-1在HBV感染發(fā)展及轉(zhuǎn)歸中的作用。通過測定HBV感染自發(fā)清除者、CHB患者（包括NAs治療者和未抗HBV者）及HBV相關(guān)慢加急性肝衰竭(A

8、cute-on-chronic liver failure，ACLF)患者血清PD-1、IL-10、IFN-γ水平，HBV DNA載量，以及外周血HBV特異性CD8+T細(xì)胞頻率，探討NAs對PD-1/PD-L1抑制通路的影響，及對宿主免疫功能的作用。通過分析不同HBV感染狀態(tài)人群及NAs治療不同應(yīng)答患者的SNP，探索PD-1的SNP在HBV感染預(yù)后轉(zhuǎn)歸中的作用，及其與NAs抗HBV治療的關(guān)系，證實(shí)NAs在抗HBV治療中免疫調(diào)節(jié)的作用，研

9、究PD-1等位基因在抗HBV治療中的作用。
　　方法:
　　1、慢性HBV感染患者程序性細(xì)胞死亡因子-1水平變化與意義
　　篩選河北醫(yī)科大學(xué)第三醫(yī)院感染科自2013年10月至2015年1月的病例:(1)慢性HBV感染病例:CHB病例符合2010年中華醫(yī)學(xué)會肝病學(xué)分會和感染病學(xué)分會制訂的《慢性乙型肝炎防治指南》診斷標(biāo)準(zhǔn)，并且排除有其他肝炎病毒合并感染者。HBV-ACLF病例診斷符合我國2012年中華醫(yī)學(xué)會感染病學(xué)分會肝衰

10、竭與人工肝學(xué)組、中華醫(yī)學(xué)會肝病學(xué)分會重型肝病與人工肝學(xué)組制定的《肝衰竭診療指南》，抗HBV治療者要求服用NAs單藥或聯(lián)合治療，未抗HBV治療者要求不曾使用任何NAs和/或干擾素抗病毒治療。(2)自發(fā)清除病例:抗-HBs、抗-HBe、抗HBc兩項(xiàng)或三項(xiàng)均陽性，HBV DNA陰性，肝功能正常，肝膽脾超聲檢查正常，未曾接受過任何抗病毒治療的既往HBV感染者。病例排除標(biāo)準(zhǔn):(1)合并妊娠及HAV、HCV、HDV、HEV、HIV、EBV、CMV等

11、其他病毒感染者;
　　(2) NAs與干擾素或中藥合用者;(3)患者伴有惡性腫瘤、嚴(yán)重免疫系統(tǒng)疾病、血液系統(tǒng)疾病或明顯精神病史。收集臨床資料包括:性別、年齡、診斷、治療、用藥時間。NAs治療病例均定期檢查肝功能(ALT、ALB、TB)、HBV病毒標(biāo)記物(HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe、抗-HBc)、HBV DNA載量。使用全自動生化分析儀檢測所有入組患者ALB、ALT、TB等血清生化指標(biāo);全自動血凝儀檢測PTA、I

12、NR;實(shí)時熒光定量PCR檢測HBV DNA載量（檢測下限為500copies/ml）;抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（Enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）檢測血清PD-1含量;Westemblot檢測肝組織中PD-1蛋白的表達(dá)水平。統(tǒng)計學(xué)分析采用IBMSPSS Statistics19統(tǒng)計軟件，計量資料以(mean±SD)表示，數(shù)據(jù)分析前進(jìn)行正態(tài)性及方差齊性檢驗(yàn)。若數(shù)據(jù)為正態(tài)分布且方差齊同(P＞0.0

13、5)則應(yīng)用t檢驗(yàn)進(jìn)行比較，若方差不齊(P＜0.05)則應(yīng)用t'檢驗(yàn)進(jìn)行比較，多組之間比較應(yīng)用單因素方差分析，組間比較采用LSD檢驗(yàn);若數(shù)據(jù)呈非正態(tài)分布或方差不齊時，采用KruskalWallis H秩和檢驗(yàn)。計數(shù)資料采用x2檢驗(yàn)。相關(guān)性分析采用Spearman等級相關(guān)分析。按α=0.05水準(zhǔn)，雙側(cè)P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　2、HBV介導(dǎo)的PD-1/PD-L1抑制通路在慢性乙型病毒性肝炎疾病進(jìn)展中的作用
　　篩選河

14、北醫(yī)科大學(xué)第三醫(yī)院感染科自2013年10月至2015年1月的病例:(1)慢性HBV感染病例:CHB病例符合2010年中華醫(yī)學(xué)會肝病學(xué)分會和感染病學(xué)分會制訂的《慢性乙型肝炎防治指南》診斷標(biāo)準(zhǔn)，并且排除有其他肝炎病毒合并感染者。HBV-ACLF病例診斷符合我國2012年中華醫(yī)學(xué)會感染病學(xué)分會肝衰竭與人工肝學(xué)組、中華醫(yī)學(xué)會肝病學(xué)分會重型肝病與人工肝學(xué)組制定的《肝衰竭診療指南》，抗HBV治療為服用NAs單藥或聯(lián)合治療。(2)自發(fā)清除病例:抗-H

15、Bs、抗-HBe、抗HBc兩項(xiàng)或三項(xiàng)均陽性，HBV DNA陰性，肝功能正常，肝膽脾超聲檢查正常，未曾接受過任何抗病毒治療的既往HBV感染者。病例排除標(biāo)準(zhǔn):(1)合并妊娠及HAV、HCV、HDV、HEV、HIV、EBV、CMV等其他病毒感染者;(2) NAs與干擾素或中藥合用者;(3)患者伴有惡性腫瘤、嚴(yán)重免疫系統(tǒng)疾病、血液系統(tǒng)疾病或明顯精神病史。收集臨床資料包括:性別、年齡、診斷、治療、用藥時間。NAs治療病例均定期檢查肝功能(ALT、

16、ALB、TB)、HBV病毒標(biāo)記物（HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe、抗-HBc）、HBV DNA載量。使用全自動生化分析儀檢測所有入組患者ALB、ALT、TB等血清生化指標(biāo);實(shí)時熒光定量PCR檢測HBV DNA載量（檢測下限為500copies/ml）;ELISA檢測血清PD-1、IL-10、IFN-γ含量;取清晨空腹外周靜脈血3ml應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測外周血HBV特異性CD8+T細(xì)胞。統(tǒng)計學(xué)分析采用IBM SPSS Sta

17、tistics19統(tǒng)計軟件，計量資料以(mean±SD)表示，數(shù)據(jù)分析前進(jìn)行正態(tài)性及方差齊性檢驗(yàn)。若數(shù)據(jù)為正態(tài)分布且方差齊同（P＞0.05）則應(yīng)用t檢驗(yàn)進(jìn)行比較，若方差不齊(P＜0.05)則應(yīng)用t'檢驗(yàn)進(jìn)行比較，多組之間比較應(yīng)用單因素方差分析，組間比較采用LSD檢驗(yàn);若數(shù)據(jù)呈非正態(tài)分布或方差不齊時，采用Kruskal WallisH秩和檢驗(yàn)。計數(shù)資料采用x2檢驗(yàn)。相關(guān)性分析采用Spearman等級相關(guān)分析。按α=0.05水準(zhǔn)，雙側(cè)P＜0

18、.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　3、程序性細(xì)胞死亡因子-1單核苷酸多態(tài)性與抗HBV感染療效的相關(guān)性分析
　　篩選河北醫(yī)科大學(xué)第三醫(yī)院感染科自2013年10月至2014年8月HBV感染病例195例。病例納入標(biāo)準(zhǔn):(1) HBV感染病例:CHB病例符合2010年中華醫(yī)學(xué)會肝病學(xué)分會和感染病學(xué)分會制訂的《慢性乙型肝炎防治指南》診斷標(biāo)準(zhǔn)，并且排除有其他肝炎病毒合并感染者。HBV-ACLF病例診斷符合我國2012年中華醫(yī)學(xué)會感染病學(xué)分

19、會肝衰竭與人工肝學(xué)組、中華醫(yī)學(xué)會肝病學(xué)分會重型肝病與人工肝學(xué)組制定的《肝衰竭診療指南》，抗HBV治療為服用NAs單藥或聯(lián)合治療。(2)自發(fā)清除病例:抗-HBs、抗-HBe、抗HBc兩項(xiàng)或三項(xiàng)均陽性，HBV DNA陰性，肝功能正常，肝膽脾超聲檢查正常，未曾接受過任何抗病毒治療的既往HBV感染者。病例排除標(biāo)準(zhǔn):(1)合并妊娠及HAV、HCV、HDV、HEV、HIV、EBV、CMV等其他病毒感染者;(2) NAs與干擾素或中藥合用者;(3)患

20、者伴有惡性腫瘤、嚴(yán)重免疫系統(tǒng)疾病、血液系統(tǒng)疾病或明顯精神病史。療效判定:NAs治療12周時血清HBV DNA應(yīng)用PCR法檢測不到或低于檢測下限(500copies/ml)，或較基線下降≥2log10為早期應(yīng)答者;12周時HBV DNA載量較基線下降＜2log10為非早期應(yīng)答者。NAs治療4周時血清HBV DNA應(yīng)用PCR法檢測不到或低于檢測下限(500copies/ml)，或較基線下降≥2log10為快速應(yīng)答者;4周時HBV DNA載量

21、較基線下降＜2log10為非快速應(yīng)答者。取清晨空腹外周靜脈血3ml，應(yīng)用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)-限制性片段長度多態(tài)性分析法，測定rs10204525、rs2227982、rs7421861和rs6710479的基因型，分析這四個位點(diǎn)等位基因分布頻率與HBV感染自發(fā)清除和NAs抗HBV療效的關(guān)系。采用IBMSPSS Statistics19軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，率的比較采用卡方檢驗(yàn)，當(dāng)出現(xiàn)P≈a或n＜40時，用Fisher精確概率法進(jìn)行計算，全部檢驗(yàn)

22、均為雙側(cè)檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。應(yīng)用SHEsis軟件進(jìn)行Hardy-Weinberg平衡分析，對照組P＞0.05為符合遺傳平衡定律。
　　結(jié)果:
　　1慢性HBV感染患者程序性細(xì)胞死亡因子-1水平變化與意義
　　1.1納入病例的人口學(xué)特點(diǎn)與臨床資料。本研究共納入86例病例。CHB組46例（未抗病毒治療組23例，NAs抗病毒治療組23例），ACLF組20例，HBV自發(fā)清除組20例。各組病例性別和年齡比較差異

23、無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。CHB未抗病毒治療組病例HBV DNA載量、ALT水平顯著高于NAs抗病毒治療組病例(P＜0.05)，兩組間TB、ALB水平比較無差異(P＞0.05)。HBV自發(fā)清除組ALB水平顯著高于CHB組和ACLF組(P＜0.05)，ALT、TB水平均顯著低于CHB組和ACLF組(P＜0.05)。CHB組ALB水平顯著高于ACLF組(P＜0.05)，HBV DNA載量、ALT、TB水平均顯著低于ACLF組(P＜0.0

24、5)。
　　1.2 CHB未抗病毒治療組、CHB NAs抗病毒治療組、ACLF組和HBV自發(fā)清除組間血清PD-1水平比較。ACLF組血清PD-1水平（17.542±2.265ng/ml）顯著高于CHB未抗病毒治療組（15.533±2.194 ng/ml）、CHB NAs抗病毒治療組（12.849±2.193 ng/ml）及HBV自發(fā)清除組（10.641±4.192ng/ml），差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.001)。CHB未抗病毒

25、治療組血清PD-1水平顯著高于CHB NAs抗病毒治療組及HBV自發(fā)清除組，CHBNAs抗病毒治療組血清PD-1水平顯著高于HBV自發(fā)清除組，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　1.3 CHB未抗病毒治療組、CHB NAs抗病毒治療組、ACLF組和HBV自發(fā)清除組間肝組織PD-1蛋白表達(dá)比較。共40例病例接受肝臟PD-1蛋白表達(dá)檢測，CHB未抗病毒治療組10例，CHB NAs抗病毒治療組10例，ACLF組10例和HBV自發(fā)

26、清除10例。Westemblot檢測示:ACLF組PD-1蛋白表達(dá)水平（1.274±0.362）顯著高于CHB未抗病毒治療組(1.074±0.088)、CHB NAs抗病毒治療組（0.813±0.156）及HBV自發(fā)清除組(0.593±0.116)，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.001)。CHB未抗病毒治療組PD-1蛋白表達(dá)水平顯著高于CHB NAs抗病毒治療組及HBV自發(fā)清除組，CHB NAs抗病毒治療組PD-1蛋白水平顯著高于HBV

27、自發(fā)清除組，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　1.4血清PD-1水平與HBV DNA載量、ALT、TB及ALB相關(guān)性分析。CHB組和ACLF組病例血清PD-1水平與HBV DNA載量均成正相關(guān)(r=0.568，P＜0.001;r=0.729，P＜0.001)。CHB組病例血清PD-1水平與ALT水平成正相關(guān)（r=0.373，P=0.011），與ALB水平呈負(fù)相關(guān)(r=-0.457，P=0.001)，與TB水平無明顯相關(guān)(

28、P＞0.05)。ACLF組病例血清PD-1水平與ALB水平呈負(fù)相關(guān)(r=-0.756，P＜0.001)，與ALT和TB水平無明顯相關(guān)(P＞0.05)。
　　2 HBV介導(dǎo)的PD-1/PD-L1抑制通路在慢性乙型病毒性肝炎疾病進(jìn)展中的作用
　　2.1納入病例的人口學(xué)特點(diǎn)與臨床資料。本研究共納入86例病例。CHB組46例（未抗病毒治療組23例，NAs抗病毒治療組23例），ACLF組20例，HBV自發(fā)清除組20例。各組病例性別和年

29、齡比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。HBV自發(fā)清除組ALB水平顯著高于CHB組和ACLF組(P＜0.05)，ALT、TB水平均顯著低于CHB組和ACLF組(P＜0.05)。CHB組ALB水平顯著高于ACLF組(P＜0.05)，HBV DNA載量、ALT、TB水平均顯著低于ACLF組(P＜0.05)。CHB未抗病毒治療組病例HBVDNA載量、ALT水平顯著高于NAs抗病毒治療組病例(P＜0.05)，兩組間TB、ALB水平比較無差異(P

30、＞0.05)。
　　2.2血清學(xué)指標(biāo)分析
　　2.2.1血清PD-1水平比較。結(jié)果同第一部分。
　　2.2.2血清IL-10水平比較。ACLF組血清IL-10水平（62.43±21.93 pg/ml）顯著高于CHB未抗病毒治療組（41.59±16.46 pg/ml）、CHB NAs抗病毒治療組（25.10±11.94 pg/ml）及HBV自發(fā)清除組(20.83±9.71 pg/ml)，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.00

31、1)。CHB未抗病毒治療組血清IL-10水平顯著高于CHB NAs抗病毒治療組及HBV自發(fā)清除組(P＜0.01)，CHB NAs抗病毒治療組血清IL-10水平與HBV自發(fā)清除組比較無顯著差異(P＞0.05)。
　　2.2.3血清IFN-γ水平比較。ACLF組血清IFN-γ水平（79.08±31.79 pg/ml）顯著高于CHB未抗病毒治療組（32.66±20.47 pg/ml）、CHB NAs抗病毒治療組（51.95±25.58

32、pg/ml）及HBV自發(fā)清除組（58.63±17.7 pg/ml），差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.001)。CHB未抗病毒治療組血清IFN-γ水平顯著低于CHB NAs抗病毒治療組及HBV自發(fā)清除組(P＜0.01)，CHB NAs抗病毒治療組血清IFN-γ水平與HBV自發(fā)清除組比較無顯著差異(P＞0.05)。
　　2.3外周血HBV特異性CD8+T細(xì)胞頻率比較。ACLF組外周血HBV特異性CD8+T細(xì)胞頻率（0.85±0.39％）

33、顯著高于CHB未抗病毒治療組(0.21±0.25％)、CHB NAs抗病毒治療組（0.41±0.47％）及HBV自發(fā)清除組（0.00±0.00％），差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.001)。CHB NAs抗病毒治療組外周血HBV特異性CD8+T細(xì)胞頻率顯著高于CHB未抗病毒治療組及HBV自發(fā)清除組(P＜0.05)，CHB NAs未抗病毒治療組外周血HBV特異性CD8+T細(xì)胞頻率明顯高于HBV自發(fā)清除組(P＜0.05)。
　　2.4相

34、關(guān)性分析
　　2.4.1 HBV DNA載量與血清PD-1、IL-10、IFN-γ水平相關(guān)性分析。CHB組和ACLF組HBV DNA載量與血清PD-1水平均成正相關(guān)(r=0.568，P＜0.001;r=0.729，P＜0.001)，與血清IL-10水平均成正相關(guān)(r=0.541，P＜0.001;r=0.560，P=0.01)，與血清IFN-γ水平均成負(fù)相關(guān)(r=-0.319，P＜0.05;r=-0.832,P＜0.001)。

35、>　　2.4.2外周血HBV特異性CD8+T細(xì)胞頻率與血清PD-1水平和HBV DNA載量相關(guān)性分析。CHB組外周血HBV特異性CD8+T細(xì)胞頻率與血清PD-1水平成正相關(guān)（r=0.438，P=0.002），與HBV DNA載量不相關(guān)(r=0.072，P=0.634)。ACLF組外周血HBV特異性CD8+T細(xì)胞頻率與血清PD-1水平和HBV DNA載量均成正相關(guān)(r=0.838，P＜0.001;r=0.595，P=0.006)。

36、　　3程序性細(xì)胞死亡因子-1單核苷酸多態(tài)性與抗HBV感染療效的相關(guān)性分析
　　3.1納入病例的人口學(xué)特點(diǎn)與臨床資料。共納入195例病例，CHB組90例（早期應(yīng)答者65例，非早期應(yīng)答者25例），ACLF組45例（快速應(yīng)答者30例，非快速應(yīng)答者15例），HBV自發(fā)清除組60例。CHB組、ACLF組和自發(fā)清除組間病例年齡、性別均無統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05)。CHB組中的早期應(yīng)答者和非早期應(yīng)答者間，ACLF組中的快速應(yīng)答者和非快速應(yīng)答者間

37、，年齡、性別，NAs治療前的HBV DNA載量、ALT、TB、ALB水平均無顯著差異(P＞0.05)。
　　3.2等位基因分布頻率與抗HBV感染的關(guān)系。
　　3.2.1 rs10204525基因型等位基因A的出現(xiàn)頻率CHB組(76.7％)、ACLF組(67.8％)和HBV自發(fā)清除組(75.8％)間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(x2=2.684，P=0.261);組間比較顯示等位基因A的出現(xiàn)頻率在HBV自發(fā)清除組(75.8％)與慢性HBV

38、感染組（CHB組+ACLF組）(73.7％)間(x2=0.955，P=0.328)，CHB組和ACLF組間（x2=2.446，P=0.118）均無統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05)。CHB組早期應(yīng)答者等位基因A的出現(xiàn)頻率(80.8％)高于非早期應(yīng)答者(66.0％)，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(x2=4.403，P=0.036);ACLF組快速應(yīng)答者等位基因A的出現(xiàn)頻率(75.0％)高于非快速應(yīng)答者(53.3％)，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（x2=4.299，P

39、=0.038）。
　　3.2.2 rs6710479基因型等位基因A的出現(xiàn)頻率HBV自發(fā)清除組(59.2％)低于CHB組(73.3％)和ACLF組(68.9％)，三組間差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(x2=54.052，P＜0.001);組間比較顯示HBV自發(fā)清除組(59.2％)等位基因A的出現(xiàn)頻率低于慢性HBV感染組（CHB組+ACLF組）(71.9％)，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(x2=6.138，P=0.013)，CHB組和ACLF組間等位基因

40、分布差異無統(tǒng)計學(xué)意義(x2=0.586，P=0.444)。CHB組早期應(yīng)答者和非早期應(yīng)答者間(x2=3.084，P=0.079)，ACLF組快速應(yīng)答者和非快速應(yīng)答者間（x2=1.435,P=0.231）等位基因A的出現(xiàn)頻率均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。
　　3.2.3 rs2227982和rs7421861基因型等位基因分布頻率在HBV自發(fā)清除組、CHB組、ACLF組間，HBV自發(fā)清除組和慢性HBV感染組(CHB組+ACLF組)

41、間，CHB組和ACLF組間，CHB組早期應(yīng)答者和非早期應(yīng)答者間，及ACLF組快速應(yīng)答者和非快速應(yīng)答者間比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）
　　3.3遺傳平衡檢驗(yàn)。應(yīng)用SHEsis軟件進(jìn)行Hardy-Weinberg平衡分析，rs10204525 CHB組早期應(yīng)答者(P＜0.001)和非早期應(yīng)答者(P=0.922)符合遺傳平衡定律，ACLF組快速應(yīng)答者(P=0.039)和非快速應(yīng)答者(P=0.447)符合遺傳平衡定律;rs671

42、0479慢性HBV感染組(P=0.011)和HBV自發(fā)清除組（P=0.286）符合遺傳平衡定律。
　　結(jié)論:
　　1 PD-1的表達(dá)與HBV感染者疾病進(jìn)展相關(guān)聯(lián)。
　　2 NAs抗HBV治療通過抑制HBV復(fù)制，促進(jìn)HBV特異性CD8+T細(xì)胞產(chǎn)生，降低PD-1/PD-L1信號通路中PD-1的表達(dá)，調(diào)節(jié)Th1/Th2平衡，改善宿主的免疫功能。
　　3 PD-1rs6710479基因等位基因A不利于病毒自發(fā)清除，易導(dǎo)致