果蠅對長鏈多不飽和脂肪酸(AA-EPA)的代謝特性研究.pdf

1、類二十烷酸是一種主要由二十碳四烯酸(arachidonic acid，AA)和二十碳五烯酸（eicosapentaenoic acid, EPA）通過環(huán)氧合酶(COX1/2)、脂氧合酶(LOX)和細胞色素P450(CYP)三種酶路徑代謝而成的脂類衍生物，主要衍生物包括前列腺素(PGs)、白細胞三烯(LTs)、凝血嗯烷(TXs)、過氧化羥基四烯二十烷酸（HPETEs）、羥基四烯二十烷酸（HETEs）、羥基五烯二十烷酸（HEPEs）和表氧化

2、三烯二十烷酸(EETs)等脂氧素類。以往研究報道表明，果蠅既不需要也不合成二十碳多不飽和脂肪酸(polyunsaturated fatty acids，PUFAs)，但也有研究證明C20 PUFAs的衍生物類二十烷酸對果蠅具有重要生理作用。為探究這一矛盾，本文以Canton-S野生型果蠅為研究對象，開展了果蠅的脂肪酸組成及果蠅是否具有產(chǎn)生相關類二十烷酸能力的系統(tǒng)性研究。
　　本研究分為三個部分:
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3、g AA或EPA的飼料以及基礎飼料作為對照分別培養(yǎng)果蠅，并檢測各組果蠅整體、頭部和胸腹部的脂肪酸組成。結果顯示，對照組果蠅脂肪酸組成為12∶0，14∶0，14∶1n-5，16∶0，16∶1n-7，18∶0，18∶1n-9，18∶2n-6，18∶3n-3;相對于對照組，AA和EPA組果蠅的脂肪酸組成分別多出了AA或EPA;其中AA組果蠅整體、頭部和胸腹部AA的相對含量分別為2.35±0.45％、2.92±0.39％和1.39±0.23％;

4、 EPA組果蠅整體、頭部和胸腹部的AA的相對含量分別為1.98±0.57％、2.92±0.39％和1.39±0.23％。該結果證實，果蠅本身不能產(chǎn)生20C以上的PUFAs，但可以通過食物吸收，并且主要富集于頭部。
　　（二）選取了AA和EPA在COX、LOX和CYP路徑代謝產(chǎn)生的15種類二十烷酸作為對象，以果蠅為研究體系，根據(jù)所選類二十烷酸的性質，通過優(yōu)化樣品前處理、液相色譜條件以及質譜檢測條件，建立了最佳的代謝產(chǎn)物定性、定量分析

5、HPLC-MS/MS方法。結果表明:在2.5 ng/ml～100 ng/ml范圍內，15種代謝產(chǎn)物均具有良好的線性關系，相關系數(shù)(R2)都在0.9900以上，檢出限為0.1-2.6 ng/g。在空白果蠅樣品中添加三個濃度水平的代謝產(chǎn)物混合標準溶液，回收率為89.3％-111.5％，相對標準偏差為1.0％-15.0％，均滿足分析方法要求。
　　（三）檢測了AA和EPA飼料組果蠅組織及AA和EPA添加組勻漿體系中AA和EPA的代謝情況

6、。結果表明:對照果蠅組織中未檢測到AA或EPA的代謝產(chǎn)物;AA和EPA飼料組果蠅組織及AA和EPA添加組果蠅勻漿體系中都檢測到了15(S)-HETE和15(S)-HEPE。15(S)-HETE和15(S)-HEPE分別是AA和EPA在人體15-LOX路徑對應的代謝產(chǎn)物，AA和EPA產(chǎn)物路徑的一致性表明，果蠅可能具有與人體15-LOX酶功能相同的代謝酶。此外，實驗表明果蠅不能產(chǎn)生15(S)-HETE和15(S)-HEPE的前體15(S)-

7、HpETE和15(S)-HpEPE，故果蠅對AA和EPA的代謝路徑與人體15-LOX路徑又存在差異。而AA在COX路徑的代謝產(chǎn)物PGH2、PGF2α和PGE2、AA在人體5-LOX路徑的代謝產(chǎn)物5(S)-HpETE和LTB4、AA在人體CYP路徑的代謝產(chǎn)物20-HETE和11(12)-EET以及EPA在人體COX路徑的代謝產(chǎn)物PGF3α和PGE3、EPA在人體CYP路徑的代謝產(chǎn)物17(18)-EpETE和17，18-DiHETE都未檢測