Wnt-β-catenin信號(hào)途徑及Sfrp1在梗阻性腎間質(zhì)纖維化中作用的研究.pdf

1、目的：制作一種單側(cè)輸尿管梗阻（unilateral ureteral obstruction，UUO）大鼠模型，模擬梗阻后積水所導(dǎo)致的腎間質(zhì)纖維化，動(dòng)態(tài)觀察梗阻性腎病時(shí)腎組織Sfrp1、Wnt1及β-catenin的表達(dá)與變化情況。探討：Sfrp1、Wnt1及β-catenin在纖維化腎臟間質(zhì)中的表達(dá)以及意義。進(jìn)而篩選出能及早預(yù)測(cè)積水腎臟組織結(jié)構(gòu)受損的實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)，為臨床上腎積水的治療提供參考。
　　方法：選取48只健康清潔級(jí)Wis

2、tar雄性大鼠，均購自河北醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。體重180-200克。隨機(jī)分為模型組(UUO組，n=24)，假手術(shù)組(SOR組，n=24)。兩組大鼠在適宜的溫度及濕度條件下喂養(yǎng)。兩組大鼠均用2％戊巴比妥鈉0.3ml/100g腹腔注射麻醉并固定。取脊柱右側(cè)旁開3cm切口，依次切開各層組織，在腎盂和輸尿管的連接部以下2cm處，用細(xì)絲線各結(jié)扎兩處，并剪斷輸尿管，UUO大鼠模型建立完成。SOR組作為對(duì)照組，僅輕柔游離右側(cè)上段輸尿管至腎盂連接部，

3、不做任何處理。術(shù)后的3、6、9天分批脫頸處死各組8只大鼠。迅速取出右腎，沿冠狀位縱形剖開，取1/4腎組織置于4％多聚甲醛固定液，石蠟包埋成蠟塊后切成4μm的病理切片。HE染色后光鏡下動(dòng)態(tài)觀察腎組織病理學(xué)改變，Masson染色后光鏡下動(dòng)態(tài)觀察腎組織間質(zhì)纖維化程度。采用免疫組化的方法測(cè)定間質(zhì)中Sfrp1、Wnt1及β-catenin的表達(dá)，結(jié)果應(yīng)用病理圖像及免疫組化分析系統(tǒng)，處理后分析得出半定量數(shù)值。相關(guān)數(shù)值用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±S)表示,使

4、用SPSS13．0 for Window軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。兩組之間的比較，采用t檢驗(yàn)；同一組內(nèi)的比較，采用單因素方差分析(One-Way ANOVA)。并認(rèn)為P<0.05時(shí)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　結(jié)果：大體觀察：SOR組的右側(cè)腎呈豌豆大小，形態(tài)外觀大致正常。UUO組腎臟體積增大，可見明顯擴(kuò)張的腎盂，腎實(shí)質(zhì)受壓變薄。并且隨著梗阻時(shí)間的延長(zhǎng)，以上變化愈顯著。
　　HE染色顯示：SOR組：腎組織無明顯異常改變。UUO組：梗阻后3d

5、可見個(gè)別的腎小管呈現(xiàn)輕度擴(kuò)張，小管間質(zhì)寬度相對(duì)增大，有少量炎性細(xì)胞散在浸潤(rùn)；6d的腎小管出現(xiàn)擴(kuò)張，偶見部分腎小管萎縮，腎小管上皮細(xì)胞腫脹、變性。腎小管周圍腎間質(zhì)增寬，腎間質(zhì)內(nèi)散在有較多巨噬、淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)；9d的腎小管擴(kuò)張明顯，腎小管結(jié)構(gòu)破壞，可見腎小管基底膜彌漫性增厚、斷裂。腎間質(zhì)寬度明顯增加，間質(zhì)中巨噬、淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)進(jìn)行性加重。纖維組織彌漫增生及膠原纖維化形成。
　　Masson染色后增寬的亮綠色膠原反映纖維化程度，間質(zhì)相對(duì)面積

6、比較的結(jié)果顯示：SOR組在各時(shí)間點(diǎn)無明顯變化，UUO組較SOR組亮綠色面積明顯升高（P<0.05），且隨著造模時(shí)間延長(zhǎng)，增寬的間質(zhì)面積進(jìn)行性增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　免疫組化結(jié)果：SOR組：腎間質(zhì)中Wnt1、β-catenin基礎(chǔ)量低表達(dá)，各時(shí)間點(diǎn)比較無顯著差異(P>0.05)。腎間質(zhì)中Sfrp1高表達(dá)，各時(shí)間點(diǎn)比較無顯著差異(P>0.05)。UUO組：Wnt1、β-catenin在腎間質(zhì)的陽性表達(dá)高于對(duì)應(yīng)時(shí)

7、間點(diǎn)的SOR組(P<0.05)，且隨著梗阻時(shí)間的延長(zhǎng)而升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。Sfrp1的陽性表達(dá)低于對(duì)應(yīng)時(shí)間點(diǎn)的SOR組(P<0.05)，且隨著梗阻時(shí)間的延長(zhǎng)而表達(dá)降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　結(jié)論：
　　1、 Wnt1、β-catenin的高表達(dá)是腎間質(zhì)纖維化的重要機(jī)制之一，即Wnt/β-catenin對(duì)腎間質(zhì)纖維化形成起重要作用。
　　2、 Sfrp1表達(dá)減少，對(duì)Wnt1抑制作