桑黃液體發(fā)酵和桑黃多糖提取純化的研究.pdf

1、桑黃是一種具有很高藥用價(jià)值及廣泛應(yīng)用前景的真菌,目前所知桑黃中的主要活性成分為桑黃多糖。本文對(duì)影響桑黃液體培養(yǎng)的理化因子進(jìn)行了研究,以菌絲生物量為指標(biāo),篩選了適宜桑黃液體培養(yǎng)的配方和培養(yǎng)條件,并對(duì)桑黃菌絲體里的多糖進(jìn)行了提取與分離純化試驗(yàn)研究。其主要內(nèi)容有：理化因子對(duì)桑黃液體發(fā)酵菌絲生物量的影響研究,桑黃多糖的提取和純化工藝研究。 不同碳源因素試驗(yàn)顯示：在供試的6種碳源中,玉米粉為最佳碳源,而且價(jià)格便宜,適宜大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)使用

2、。不同氮源因素試驗(yàn)顯示：在供試的5種氮源中,黃豆粉對(duì)菌絲生物量的影響優(yōu)于其他氮源,因此選擇黃豆粉為最佳氮源。無機(jī)鹽及生長因子的試驗(yàn)顯示：磷酸二氫鉀、硫酸鎂對(duì)菌絲的生長有促進(jìn)作用。在碳源、氮源和無機(jī)鹽的基礎(chǔ)上,進(jìn)行了培養(yǎng)基配比正交實(shí)驗(yàn),確定了桑黃液體發(fā)酵的最佳培養(yǎng)基配比為玉米粉4％、黃豆粉1.5％、磷酸二氫鉀0.1％、硫酸鎂0.1％。以碳源、氮源為影響因子的菌絲生物量的響應(yīng)面方程為:z=1.7950x+1.1967y-0.1967x2-0

3、.1267y2-0.1850xy-2.9722,式中:z-為菌絲生物量,x-為碳源,y-為氮源。 培養(yǎng)條件因子中研究了溫度、pH值、裝液量、轉(zhuǎn)速、接種量、培養(yǎng)時(shí)間等因子對(duì)桑黃液體發(fā)酵中菌絲產(chǎn)量的影響。試驗(yàn)結(jié)果：桑黃的菌絲體在pH6.5的條件下,按15％的接種量接種于裝有100ml最佳培養(yǎng)基的250ml搖瓶中,在130r/min振蕩培養(yǎng)箱中26℃,恒溫發(fā)酵培養(yǎng)7d,即可得到大量的菌絲體。 桑黃粗多糖的提取工藝與提取時(shí)間、提

4、取溫度、提取次數(shù)、溶劑比有密切關(guān)系。本實(shí)驗(yàn)采用熱水浸提法,對(duì)這些單因素影響進(jìn)行了逐一試驗(yàn),得到桑黃多糖的最佳提取時(shí)間為2.5h,最佳提取溫度為60℃,最佳提取次數(shù)為3次,最佳料液比為14倍。 采用了Sevag法對(duì)桑黃粗多糖進(jìn)行去蛋白試驗(yàn),設(shè)計(jì)了三因素三水平的正交試驗(yàn),試驗(yàn)結(jié)果為,去蛋白質(zhì)的最佳條件是Sevag溶液中氯仿和正丁醇的體積比為10:3,樣品和Sevag溶液的體積比為1:1,振蕩時(shí)間為10min。以樣品和Sevag溶液的

5、體積比,氯仿和正丁醇的體積比為影響因素的蛋白去除率響應(yīng)面方程:z=121.5167x+32.4499y-50.0999x2-4.4299y2-2.5600xy-46.7733,式中:z-蛋白質(zhì)去除率/％,x-樣品：Sevag溶液(V:V),y-氯仿：正丁醇(V:V)。 本研究采用了大孔吸附樹脂(AB-8)、DEAE-纖維素對(duì)桑黃多糖進(jìn)行了初步的分離,然后用凝膠柱層析(Sephadex G-100)進(jìn)一步純化,經(jīng)過初步分離后,得到