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文檔簡介
1、款冬花為止咳化痰的常用中藥。目前對款冬的研究較少,其止咳化痰活性成分與作用靶點均不明確,轉(zhuǎn)錄組研究也未見報道。傳統(tǒng)用藥經(jīng)驗認為款冬花蕾在采收期藥效最好,開花后藥效下降且不能入藥。中藥藥效與其化學(xué)成分種類及含量密切相關(guān),因此,可以通過不同發(fā)育時間藥材化學(xué)成分和藥效差異的比較推出其藥效物質(zhì)基礎(chǔ)。
目的:通過對不同發(fā)育時期(采收期花蕾、次年大地解凍后開花前花蕾、開花期款冬花)進行化學(xué)成分與藥效學(xué)研究分析找到款冬的止咳化痰活性物質(zhì),并
2、找到活性物質(zhì)的作用靶點。同時,采用DGE技術(shù)從中找到被注釋到的與款冬中化學(xué)成分生物合成相關(guān)的差異表達基因,以期從轉(zhuǎn)錄水平上闡釋不發(fā)育時期款冬中有效成分的積累規(guī)律,為款冬活性成分的研究提供理論依據(jù)。
方法:本文利用核磁代謝組學(xué)技術(shù)結(jié)合止咳化痰動物模型對三個不同發(fā)育時期的款冬進行化學(xué)成分分析及藥效學(xué)評價,找到款冬止咳化痰的有效活性物質(zhì)。采用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)對款冬止咳化痰的有效成分、作用靶點進行預(yù)測分析,并通過轉(zhuǎn)錄組研究在基因水平上對不同
3、發(fā)育時期款冬有效物質(zhì)的積累情況進行驗證。
結(jié)果:(1)利用核磁代謝組學(xué)技術(shù)對三個不同發(fā)育時期的款冬花水提物、水提物不同萃取部位進行整體化學(xué)成分研究,并利用氨水止咳和酚紅祛痰實驗對其進行藥效學(xué)比較,通過分析與藥效變化一致的化學(xué)成分來找出款冬止咳化痰的有效成分為乙酸、脯氨酸、谷氨酸、富馬酸、咖啡酸、綠原酸,蘆丁、山奈酚、3,5-O-二咖啡??鼘幩帷?,2-二甲基-6-乙酰基苯并二氫吡喃酮、3,4-O-二咖啡酰奎寧酸、EMDNT、款
4、冬酮、β-谷甾醇、谷甾酮、4,5-O-二咖啡酰奎寧酸、Bauer-7-ene-3β,16α-diol。由單邊量分析結(jié)果可以看出三個不同時期的款冬對3-羥基丁酸、亮氨酸、膽堿、甘油、谷氨酸、β-葡萄糖、異亮氨酸、甘油磷脂酰膽堿、乳酸、纈氨酸的調(diào)節(jié)作用與藥效一致(上升或下降),說明這10個化合物可能為款冬止咳化痰的藥效標(biāo)志物。MetPA結(jié)果顯示款冬主要對纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸的生物合成,半乳糖代謝,甘油磷脂代謝等多條代謝途徑產(chǎn)生調(diào)節(jié)作用。
5、
(2)結(jié)果顯示,在細胞過程中發(fā)揮重要作用的Eosinophil cationic protein、Interleukin-2、Thyroid hormone receptor alpha、Trafficking protein particle complex subunit3、Mitogen-activated protein kinase14、Histamine N-methyltransferase、Macrophag
6、e metalloelastase、Glutathione S-transferase Mu1、Histo-blood group ABO system transferase、Tyrosine-protein kinase ABL1以及Prostaglandin G/H synthase2是款冬主要活性成分潛在靶點蛋白群。COX-2、TRAPPC3、MAPK14、HNMT、MMP12、ABO、GSTM1、RNASE3、IL2和THRA
7、等是其潛在靶點基因群。
(3)在苯丙素與黃酮類的生物合成途徑中與咖啡??崴嵯嚓P(guān)的酶羥基肉桂酰輔酶A(CQT)和香豆酸-3-羥基化酶(C3H)、芥子酸相關(guān)的5-羥基阿魏酸-O-甲基轉(zhuǎn)移酶(COMT)以及槲皮素和山奈酚相關(guān)的黃酮類合成酶(FLS)得到注釋。根據(jù)這些酶相關(guān)基因在三個不同發(fā)育時期的款冬中的表達結(jié)果,可以看出芥子酸的含量在開花時達到最高,而咖啡??崴?、槲皮素和山奈酚的含量在采收期最高,開花期最低。轉(zhuǎn)錄組結(jié)果與化學(xué)結(jié)果
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