龍眼殼多糖的分離提取及其活性初步研究.pdf

1、目的：從龍眼干果殼中分離、提取龍眼殼多糖，對(duì)其進(jìn)行初步化學(xué)分析和初步的免疫活性及抗腫瘤活性研究。
　　 方法：通過(guò)正交實(shí)驗(yàn)來(lái)確定龍眼殼多糖最適的提取方法，并以此方法從中提取龍眼殼多糖；借助Sevage法-酶法和H2O2脫色素法分別對(duì)龍眼殼多糖脫蛋白和脫色素；多糖含量用硫酸-苯酚法進(jìn)行測(cè)定；使用DEAE-纖維素柱層析和丙烯葡聚糖凝膠色譜S-300柱層析對(duì)龍眼殼多糖進(jìn)行分級(jí)純化。采用柱色譜、醋酸薄膜纖維電泳和比旋光度法檢測(cè)龍眼殼多糖

2、的純度；通過(guò)凝膠色譜法測(cè)定龍眼殼多糖的分子量；通過(guò)三氟乙酸完全酸水解法測(cè)定龍眼殼多糖的單糖的成分。
　　 在體外免疫活性的實(shí)驗(yàn)中，用MTT法測(cè)定龍眼殼多糖已除蛋白樣品(LP1-2A)和龍眼殼多糖未除蛋白樣品(LP1-2B)對(duì)小鼠脾淋巴細(xì)胞的增殖能力和ConA誘導(dǎo)的小鼠脾淋巴細(xì)胞的增殖能力；酶聯(lián)免疫吸附反應(yīng)(ELISA)分析LP1-2A和LP1-2B對(duì)小鼠脾淋巴細(xì)胞分泌IL-2和ConA誘導(dǎo)的小鼠脾淋巴細(xì)胞分泌IL-2的作用；LD

3、H釋放法測(cè)定LP1-2A和LP1-2B對(duì)NK細(xì)胞活性的作用。
　　 在體內(nèi)免疫活性的實(shí)驗(yàn)中，通過(guò)灌胃給藥方式，MTT測(cè)定LP1-2A和LP1-2B對(duì)小鼠脾淋巴細(xì)胞的增殖能力和ConA誘導(dǎo)的小鼠脾淋巴細(xì)胞的增殖能力、ELISA分析LP1-2A和LP1-2B對(duì)小鼠脾淋巴細(xì)胞分泌IL-2和ConA誘導(dǎo)的小鼠脾淋巴細(xì)胞分泌IL-2的作用、LDH釋放法測(cè)定LP1-2A和LP1-2B對(duì)NK細(xì)胞活性的作用。
　　 在體外抗腫瘤的實(shí)驗(yàn)中

4、，用MTT法測(cè)定LP1-2A和LP1-2B對(duì)腫瘤細(xì)胞Bel-7404、SKVO3、MCF-7的抑制作用。
　　 在體內(nèi)抗腫瘤實(shí)驗(yàn)中，腹腔接種S180腹水瘤細(xì)胞，小鼠灌胃給藥LP1-2A和LP1-2B，計(jì)算小鼠的生命延長(zhǎng)率。
　　 結(jié)果：龍眼殼多糖的最適熱水浸提條件為浸提溫度為90℃，浸提時(shí)間為3.5h，料液比為1∶30，浸提次數(shù)為3次。在此條件下提取出的龍眼殼粗多糖的得率為1.31％，其中龍眼殼粗多糖的多糖含量為27.3

5、3％。龍眼殼多糖己除蛋白樣品(LP1-2A)分子量為1.14×104u。紅外光譜顯示該龍眼殼多糖為α-D-型端基吡喃葡萄糖。完全酸水解后的龍眼殼多糖的單糖成分為葡萄糖。
　　 LP1-2A和LP1-2B的體外免疫活性實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，體外單獨(dú)促進(jìn)正常小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖作用和體外協(xié)同ConA促進(jìn)正常小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖作用實(shí)驗(yàn)中，濃度在300～4.7mg/L范圍內(nèi)，刺激指數(shù)均隨著其濃度的增加而增加。體外直接作用對(duì)小鼠脾淋巴細(xì)胞分泌IL-

6、2影響和體外對(duì)ConA誘導(dǎo)的小鼠脾淋巴細(xì)胞分泌IL-2影響實(shí)驗(yàn)中，濃度在300～4.7mg/L范圍內(nèi)，小鼠脾淋巴細(xì)胞分泌IL-2的量隨著其濃度的增加而增加。體外對(duì)正常小鼠脾臟NK細(xì)胞活性影響的實(shí)驗(yàn)中，濃度在300～4.7mg/L范圍內(nèi)，NK細(xì)胞活性隨著其濃度的增加而增強(qiáng)。
　　 LP1-2A和LP1-2B的體內(nèi)免疫活性結(jié)果顯示，體內(nèi)單獨(dú)促進(jìn)正常小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖作用和體內(nèi)協(xié)同ConA促進(jìn)正常小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖作用實(shí)驗(yàn)中，劑量在2

7、50～62.5mg/L范圍內(nèi)，刺激指數(shù)隨著其劑量的增加而增加。體內(nèi)直接作用對(duì)小鼠脾淋巴細(xì)胞分泌IL-2影響和體內(nèi)對(duì)ConA誘導(dǎo)的小鼠脾淋巴細(xì)胞分泌IL-2影響的實(shí)驗(yàn)中，劑量在250～62.5mg/L范圍內(nèi)，小鼠脾淋巴細(xì)胞分泌IL-2的量隨著劑量的增加而增加。體內(nèi)對(duì)正常小鼠脾臟NK細(xì)胞活性影響的實(shí)驗(yàn)中，劑量在250～62.5mg/L范圍內(nèi)，NK細(xì)胞活性隨著劑量的增加而增強(qiáng)。
　　 LP1-2A和LP1-2B的體外抗腫瘤實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示

8、，在400～50mg/L的濃度范圍內(nèi)，隨著濃度的增加，對(duì)肝癌細(xì)胞Bel-7404、卵巢癌細(xì)胞SKVO3、乳腺癌細(xì)胞MCF-7的生長(zhǎng)抑制率隨著濃度的增加逐漸增加。
　　 LP1-2A和LP1-2B的體內(nèi)抗腫瘤結(jié)果顯示，在320～80mg/L的劑量范圍內(nèi)，當(dāng)劑量為320mg/L時(shí)，LP1-2A和LP1-2B對(duì)S180腹水瘤小鼠的生命延長(zhǎng)率分別為74.47％和32.98％。
　　 結(jié)論：龍眼殼多糖己除蛋白樣品(LP1-2A)是