基于iTRAQ技術(shù)的結(jié)核性攣縮膀胱及狹窄輸尿管組織蛋白質(zhì)組學研究及差異蛋白驗證.pdf

1、目的：
　　本研究通過蛋白質(zhì)組學技術(shù)篩選正常膀胱組織與結(jié)核性攣縮膀胱組織、正常輸尿管組織與結(jié)核性狹窄輸尿管組織標本之間共有的差異蛋白，查閱文獻并從差異蛋白中篩選可能與膀胱及輸尿管纖維化病變發(fā)生、發(fā)展的相關(guān)蛋白，通過蛋白質(zhì)免疫印跡技術(shù)進行差異蛋白驗證，為膀胱攣縮及輸尿管狹窄的分級、診斷、治療提供新的方法及靶點。
　　方法：
　　第一部分：收集2015年1月至2016年12月解放軍309醫(yī)院泌尿外科確診泌尿系結(jié)核患者的攣縮

2、膀胱及狹窄輸尿管組織各2塊；獲取我院同一時期DCD供者的膀胱及輸尿管組織各2塊作為正常對照。4種組織混合后用iTRAQ標記技術(shù)（相對和絕對定量同位素標記）聯(lián)合LC-MSMS(液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜)對各組的總蛋白進分析，將在正常膀胱與攣縮膀胱、正常輸尿管與狹窄輸尿管組織中表達差異在2倍及2倍以上的蛋白質(zhì)定義為差異蛋白，并篩選2組之間共同表達的差異蛋白。通過Uniprot、DAVID、String、Wego數(shù)據(jù)庫對共有差異蛋白進行功能聚類、細胞

3、定位、相互作用分析。第二部分：分別選取上述4種組織各6塊，進行Masson染色，驗證攣縮膀胱、狹窄輸尿管組織膠原纖維的表達量；從共有的差異蛋白中挑選微纖絲相關(guān)糖蛋白4(MFAP4)和纖維調(diào)節(jié)素（FMOD）進行蛋白質(zhì)免疫印跡（Western blot）驗證。
　　結(jié)果：
　　第一部分：通過蛋白質(zhì)組學相關(guān)實驗，在正常膀胱組織與攣縮膀胱組織組共鑒定出188種差異蛋白質(zhì)，正常輸尿管與狹窄輸尿管組共鑒定出130種差異蛋白質(zhì)，2組所共有

4、的差異蛋白質(zhì)48種，其中20種差異蛋白質(zhì)下調(diào)，28種蛋白質(zhì)表達上調(diào)；48種差異蛋白質(zhì)在DAVID數(shù)據(jù)庫中共有28種蛋白質(zhì)被標記，這28種蛋白質(zhì)主要涉及17種生物學過程，5種分子功能途徑和13種細胞組成；48種蛋白質(zhì)在String數(shù)據(jù)庫中，39種蛋白質(zhì)被檢測到，共形成3條相互作用網(wǎng)絡(luò)。
　　第二部分：Masson染色提示在攣縮膀胱組織與狹窄輸尿管組織中，肌層可見大量膠原纖維表達，攣縮膀胱與正常膀胱、狹窄輸尿管與正常輸尿管相比，膠原纖

5、維表達明顯增高，差異具有統(tǒng)計學意義；western blot結(jié)果提示MFAP4、FMOD在攣縮膀胱及狹窄輸尿管中表達明顯增高，差異具有統(tǒng)計學意義。
　　結(jié)論：
　　1、iTRAQ技術(shù)聯(lián)合LC-MSMS可對樣本蛋白進行定性、定量鑒定，篩選出差異蛋白，并對蛋白進行生物信息學分析；
　　2、纖維調(diào)節(jié)素蛋白(FMOD)在病變組織中表達上調(diào)，是影響膠原纖維合成的重要因素，與膀胱及輸尿管纖維化關(guān)系密切。
　　3、人微纖絲相關(guān)