樺褐孔菌多糖的分離純化及抗氧化活性研究.pdf

1、樺褐孔菌(Inonotus obliquus(Fr.)Pilat)屬于真菌門(mén)、擔(dān)子菌亞門(mén)、層菌綱、非褐菌目、多孔菌科、褐臥孔菌屬，在俄羅斯通常被稱為chaga。是一種藥用真菌，滋生在北半球北緯40°～50°的地區(qū)，是一種微帶苦澀的多孢子堅(jiān)硬的菌類植物，通常生長(zhǎng)在光線昏暗且濕度較高的山林中，主要生長(zhǎng)于腐樹(shù)或其樹(shù)木根部。樺褐孔菌被人們所知并且得到各國(guó)學(xué)者的廣泛關(guān)注。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)樺褐孔菌含有大量的多糖體，這些多糖體可以抑制腫瘤癌細(xì)胞的擴(kuò)散，提高

2、細(xì)胞的免疫力，從而起到抗癌、抗氧化以及增強(qiáng)免疫力的作用，當(dāng)今抗腫瘤藥物的研究發(fā)展，多糖已經(jīng)成為一個(gè)主要的發(fā)展方向。
　　在提取方法和活性等方面，各國(guó)學(xué)者們已經(jīng)進(jìn)行了大量探索性的研究工作，但是多集中于粗多糖層面，多糖的提取也多集中于水浸提，輔助方法中多用微波輔助。通過(guò)大量查閱相關(guān)文獻(xiàn)，并結(jié)合本實(shí)驗(yàn)室的實(shí)際試驗(yàn)情況，本文的主要研究?jī)?nèi)容為：
　　1、采用系統(tǒng)溶劑法，即分別以水、草酸銨(3％)、NaOH(5%)為提取溶劑，對(duì)樺褐孔菌

3、多糖進(jìn)行提取，并且采用光波輔助，最優(yōu)提取工藝條件為：料液比為1:30、溫度95℃、提取時(shí)間2.5 h，光波功率1200W。并且證實(shí)光波輔助對(duì)于樺褐孔菌粗多糖的提取得率有一定的提高作用。
　　2、以多糖提取率和多糖含量為判斷指標(biāo)，利用料液比、提取時(shí)間和提取溫度三種影響因素設(shè)計(jì)正交試驗(yàn)，以得到一組最優(yōu)提取條件來(lái)優(yōu)化傳統(tǒng)的水浸提方法：料液比1:30、提取溫度95℃、提取時(shí)間2.5h。
　　3、通過(guò)乙醇分級(jí)獲得三種不同的多糖組分：I

4、OP40、IOP60、IOP80，含量分別為：19.4%、41.12%、9.23%。
　　4、使用Sevage法和大孔樹(shù)脂法去蛋白及色素來(lái)進(jìn)一步純化樺褐孔菌多糖，并通過(guò)正交試驗(yàn)對(duì)Sevage法進(jìn)行了優(yōu)化，優(yōu)化條件為：Sevage試劑添加量為多糖提取液體積的2倍，氯仿正丁醇體積比為4:1，振搖時(shí)間就為25 min，脫蛋白次數(shù)3次。
　　5、提取了三種水溶性多糖成分(IOP40，IOP60和IOP80)，分析了它們的理化特性，包

5、括總糖含量、蛋白質(zhì)含量、單糖成分和百分含量。
　　6、依據(jù)2,2-聯(lián)苯-1-苦味基(DPPH)、羥基自由基、過(guò)氧化物陰離子和過(guò)氧化氫的還原力測(cè)試和清除能力，研究了IOP40、IOP60和IOP80的體外抗氧化性能。一般來(lái)說(shuō)，隨著測(cè)試范圍內(nèi)濃度的升高，三種多糖成分的抗氧化能力逐漸增大。還原力、DPPH清除能力、H2O2清除能力和羥自由基清除能力的次序都是 IOP60> IOP40>IOP80。這些發(fā)現(xiàn)說(shuō)明從樺褐孔菌中提取的三種多糖成