樺褐孔菌多糖的提取、純化及其抗腫瘤活性研究.pdf

1、隨著人們工作壓力的增大，腫瘤患者越來越多，且具有了年輕化的趨勢，癌癥已成為危害人類健康的第二殺手，僅次子心腦血管疾病。目前治療惡性腫瘤仍以化療、放療、手術(shù)治療為主。臨床使用的抗腫瘤藥物都會有不同程度的毒副作用，比如化療藥物在破壞腫瘤細(xì)胞的同時，又破壞正常組織的細(xì)胞，使人體的免疫系統(tǒng)紊亂。從中藥，尤其是植物資源中尋找療效好、毒副作用小的抗腫瘤活性成分，已成為國內(nèi)外抗腫瘤研究的熱門開發(fā)領(lǐng)域。動物和臨床試驗表明:樺褐孔菌多糖沒有明顯毒副作用，

2、并已被證明具有抗腫瘤的功效。本實驗在研究提取、脫蛋白和脫色方法的基礎(chǔ)上，進一步對其單糖組成成分及其體外抗腫瘤活性進行了研究。
　　首先，對樺褐孔菌粗多糖成分進行了提取，并通過正交試驗確定了最佳提取工藝，其參數(shù)為:料液比1∶40（W/V）、提取時間2.5h、提取溫度90℃，在優(yōu)化條件下進行重復(fù)實驗，得出的多糖平均得率為1.82％，重復(fù)性良好，多糖的純度達到21.1％。
　　其次，進行了粗多糖的脫蛋白質(zhì)和脫色實驗。通過考察多糖保

3、留率和蛋白脫除率，比較了Sevage法、三氯乙酸(TCA)法、三氯乙酸-正丁醇(TCA-NBA)法、鹽酸法、酶法輔助等方法的脫蛋白效果，結(jié)果酶法輔助三氯乙酸-正丁醇法的脫蛋白效果優(yōu)，蛋白脫除率達到82.3％，且多糖保留率較高，達到76.1％，經(jīng)脫蛋白的多糖純度提高到81.1％;采用活性炭粉末、過氧化氫、殼聚糖和聚酰胺層析柱對樺褐孔菌多糖進行脫色，從脫色率和多糖保留率兩方面進行考察，選擇了脫色效果優(yōu)的聚酰胺層析柱為適宜的脫色方法，其脫色率

4、達到89.3％，多糖保留率為91.7％，經(jīng)脫色的多糖純度提高到85.8％。
　　再次，對樺褐孔菌多糖中的單糖組成進行了分析。本論文采用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)柱前衍生化高效液相色譜新方法來分析樺褐孔菌多糖中的單糖組成。結(jié)果顯示，樺褐孔菌多糖主要含有甘露糖、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖、木糖和阿拉伯糖6種單糖。各單糖之間摩爾比為:甘露糖∶鼠李糖∶葡萄糖∶半乳糖∶木糖∶阿拉伯糖=2.13∶1.36∶7.01∶2.98∶1∶

5、1.78。在樺褐孔菌多糖的PMP衍生化色譜圖中發(fā)現(xiàn)了未知峰，經(jīng)HPLC-MS分析未知物的m/z為164。采用在水解樣品中加入一定量巖藻糖對照品的方法進行進一步的驗證，結(jié)果顯示，加入一定量巖藻糖的樣品組在未知成分的相應(yīng)保留時間位置的峰信號明顯增加，由此推斷未知成分是巖藻糖。
　　最后，采用MTT法研究了樺褐孔菌多糖對人宮頸癌細(xì)胞(Hela)、小鼠骨髓瘤細(xì)胞(SP2)、人張氏肝細(xì)胞(Chang)增殖的抑制作用。樺褐孔菌多糖濃度在10～