酵母菌3-磷酸甘油脫氫酶基因（gpd1）的克隆及其在高滲脅迫下mRNA轉錄水平的差異.pdf

1、環(huán)境滲透壓的變化對于酵母細胞的生存有著十分重要的影響。當酵母菌處于高滲透壓環(huán)境中的時候，酵母菌的生存將受到極大的威脅。在這個時候酵母菌可以通過增加胞內甘油的積累水平來減小細胞膜內外的滲透壓差以實現(xiàn)對高滲脅迫的適應。GPD1是一個由391個氨基酸組成的蛋白質，它能催化磷酸二羥丙酮生成3-磷酸甘油，在酵母細胞適應高滲透壓脅迫的過程中起著重要的作用。高滲脅迫下GPD1的表達量和它的酶活力都將會有一定程度的上升，而且gpd1基因的突變會直接導致

2、酵母細胞無法在高滲環(huán)境中生長。 本研究選取生產中常用的酵母菌株YY、FHS和WFB，通過實驗分析造成三種酵母菌株抗高滲能力差異的原因。首先分別用濃度為1％、3％、5％的NaCl對酵母菌株YY、FHS和WFB進行處理比較高滲脅迫對這三個菌株生長速度的影響。結果發(fā)現(xiàn)：在NaCl的濃度為1％和3％時，NaCl對FHS菌株生長速度的影響明顯小于YY和WFB菌株；另外，在NaCl的濃度為1％時，NaCl對YY菌株生長速度的影響明顯小于W

3、FB菌株；當NaCl的濃度為5％時，NaCl對這三個菌株生長速度影響的強弱依次為WFB、FHS、YY，但差距并不明顯。由此可以看出，F(xiàn)HS菌株耐高滲能力最強、YY菌株次之、WFB菌株最差。 分別克隆酵母菌株YY、FHS和WFB的gpd1基因片段并測序，分析這三個酵母菌株gpd1基因序列的差異。用生物學軟件VectorNTI將YY、FHS和WFBgpd1基因序列與國際基因庫(GeneBank)中的gpd1序列(X76859)進行

4、對比，發(fā)現(xiàn)其同源性分別為99.32％、99.83％、99.83％。將這些DNA序列轉化為氨基酸序列，再用VectorNTI比對這些氨基酸序列，結果發(fā)現(xiàn)受檢菌株YY、FHSgpd1基因序列對應的氨基酸序列與GeneBank中gpd1序列(X76859)對應的氨基酸序列完全一致，而WFB與它們的同源性只有98.5％。 分別用濃度為1％、3％、5％的NaCl對酵母菌株YY、FHS和WFB進行處理，比較高滲脅迫對這三個菌株gpd1基因