鴨、鵝、鴯鹋生長素前體cDNA克隆、定位、組織表達(dá)及分子進(jìn)化研究.pdf

1、ghrelin是促生長激素分泌受體的天然配體,全長28個氨基酸殘基的多肽.具有刺激垂體生長激素分泌的重要作用,其第3位絲氨酸殘基為辛酰基化修飾,其前體preproghrelin為全長117個氨基酸殘基的多肽.根據(jù)雞preproghrelin的cDNA序列(dEST accession no.AB075215,836bp)設(shè)計引物,以鴨、鵝、鴯鹋腺胃cDNA為模板,通過RT-PCR及3'-RACE的方法,將各個產(chǎn)物經(jīng)過回收,再經(jīng)連接轉(zhuǎn)化,

2、克隆測序,拼接后得到鴨、鵝、鴯鹋preproghrelin基因的cDNA序列及ghrelin的cDNA序列,并由此推測出preproghrelin及ghrelin的氨基酸序列.系統(tǒng)進(jìn)化分析表明,鴨preproghrelin氨基酸序列與鵝preproghrelin的氨基酸序列最先聚類合并,在進(jìn)化上顯示靠得最近,然后與鴯鹋,雞和火雞preproghrelin氨基酸序列聚類合并,接著與牛蛙、各種魚類聚合,然后再與牛、羊等聚合.符合按照形態(tài)特征

3、進(jìn)行判定的系統(tǒng)進(jìn)化關(guān)系.根據(jù)雞preproghrelin的基因組序列(accession no AY303688.)設(shè)計引物,通過篩選實驗室已有的絲毛烏骨雞BAC文庫,繼而得到含雞preproghrelin的BAC克隆,將其作為探針進(jìn)行標(biāo)記,用FISH方法將雞的preproghrelin定位在GGA2q.1.1.根據(jù)雞GAPDH的cDNA序列(dEST accession no.K01458,1284bp)設(shè)計引物,以其PCR產(chǎn)物作為內(nèi)