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文檔簡介
1、蛋白質(zhì)組學(xué)是連接基因組學(xué)、遺傳學(xué)和生理學(xué)的一門學(xué)科,目前已成為研究生物科學(xué)各個領(lǐng)域的必不可少的學(xué)科。在蛋白質(zhì)組學(xué)研究中,蛋白質(zhì)的提取、分離及低豐度蛋白的富集等步驟直接影響后續(xù)的蛋白質(zhì)鑒定結(jié)果。低豐度蛋白質(zhì)是植物體中重要的活性物質(zhì),參與新陳代謝、轉(zhuǎn)錄和翻譯等多種生理及病理過程,低豐度蛋白的富集對植物蛋白質(zhì)組學(xué)的研究具有重要意義。高豐度蛋白與低豐度蛋白之間的動態(tài)范圍可達(dá)到12個數(shù)量級,導(dǎo)致了對低豐度蛋白質(zhì)檢測困難。組合肽配體庫技術(shù)是一種新型
2、的富集低豐度蛋白的方法,能夠?qū)崿F(xiàn)在降低高豐度蛋白質(zhì)豐度的同時富集低豐度蛋白質(zhì),目前已被應(yīng)用于各領(lǐng)域的蛋白質(zhì)組學(xué)研究中。本論文對水稻葉片蛋白質(zhì)組提取、分離與富集技術(shù)進(jìn)行研究,為水稻蛋白質(zhì)組研究提供了技術(shù)支撐,為深入研究水稻蛋白質(zhì)組提供了理論基礎(chǔ)。
1、確立了酚法提取、二維液相色譜分離水稻葉片蛋白質(zhì)組的方法。此提取方法為后續(xù)蛋白質(zhì)的富集研究提供了技術(shù)支撐。比較了水稻葉片蛋白質(zhì)提取方法(酚法、十二烷基硫酸鈉法(SDS法)和三氯乙酸/
3、丙酮法(TCA/丙酮法))、液相色譜分離系統(tǒng)(一維液相色譜與二維液相色譜)對蛋白質(zhì)鑒定數(shù)量的影響。結(jié)果表明:二維液相色譜條件下,酚法、SDS法和TCA/丙酮法鑒定的蛋白質(zhì)數(shù)目為2712、2415和1914,分別是一維液相色譜條件下鑒定到的蛋白質(zhì)數(shù)目的2.7、2.5和1.9倍。與SDS法和TCA/丙酮沉淀法相比,酚法不但鑒定到的蛋白質(zhì)數(shù)量多,而且能夠鑒定到一些極端蛋白質(zhì)。此外,對二維液相色譜條件下3種蛋白質(zhì)提取方法提取的蛋白質(zhì)進(jìn)行分類發(fā)現(xiàn)
4、3種方法鑒定到的蛋白質(zhì)的功能存在互補(bǔ)性。本方法為水稻蛋白質(zhì)組學(xué)研究提供了技術(shù)支撐,同時也為其他作物的蛋白質(zhì)組學(xué)研究技術(shù)提供重要的借鑒。
2、利用組合肽配體庫技術(shù)富集水稻葉片中的低豐度蛋白質(zhì),并對該方法適用于水稻葉片蛋白質(zhì)富集過程進(jìn)行優(yōu)化。通過考察三種緩沖液pH(pH7的Tris緩沖溶液、pH9的Tris緩沖溶液和pH4的醋酸鹽緩沖溶液)、三種洗脫液(8mol/L尿素/2%CHAPS/5%乙酸、煮沸的4%SDS/50mmol/L
5、 DTT和9mol/L尿素/5%乙酸)對組合肽配體庫技術(shù)富集效率的影響,明確了對于水稻葉片蛋白質(zhì),組合肽配體庫技術(shù)在pH7和pH9有較好的富集效果,且鑒定到的粗蛋白與不同pH組分中的蛋白質(zhì)存在互補(bǔ)性。此外,8mol/L尿素/2%CHAPS/5%乙酸對蛋白質(zhì)的洗脫最徹底。本方法為CPLL技術(shù)應(yīng)用于植物蛋白質(zhì)組學(xué)研究以及低豐度蛋白質(zhì)的分離純化提供技術(shù)支持。
3、研究了不同鎘濃度處理后鑒定到的水稻葉片蛋白質(zhì)組的表達(dá)差異。對照組、鎘離
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