骨橋蛋白與子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞侵襲、轉(zhuǎn)移的相關(guān)性研究.pdf

1、子宮內(nèi)膜癌（endometrial carcinoma，EC）是最常見(jiàn)的一種影響女性生殖的惡性疾病且發(fā)病率逐年升高。近年來(lái)，隨著經(jīng)濟(jì)的發(fā)展、人們的飲食水平和生活方式的變化、非正規(guī)的激素替代治療及濫用性激素等眾多因素，導(dǎo)致子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生率呈明顯上升趨勢(shì)并且患病人群多為年輕人，成為嚴(yán)重威脅我國(guó)女性生殖健康的惡性腫瘤。
　　骨橋蛋白(osteopo ntin，OPN)是一種具有多種生物學(xué)功能的鈣結(jié)合磷酸化糖蛋白，廣泛存在于人體的各個(gè)組

2、織及體液中，與腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖和侵襲轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，被認(rèn)為是一種新的腫瘤標(biāo)志物。研究結(jié)果表明近年來(lái)骨橋蛋白在婦科腫瘤中的功能和作用受到越來(lái)越多的重視。
　　目的:本文選用人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞（HEC-1A細(xì)胞），采用CCK-8實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)、Transwell小室實(shí)驗(yàn)，檢測(cè)人重組骨橋蛋白(rhOPN)對(duì)HEC-1A細(xì)胞增殖能力、侵襲能力和遷移能力的影響。分析rhOPN對(duì)HEC-1A細(xì)胞MMP-2、E-cadherin、N-cadh

3、erin和Vimentin表達(dá)的影響及與相關(guān)通路分子ERK和AKT的相關(guān)性。
　　方法:(1)采用人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞（HEC-1A細(xì)胞）為體外模型，用不同濃度的rhOPN(0ng/ml、100ng/ml、200ng/ml、300ng/ml、400ng/ml)處理細(xì)胞24h，通過(guò)Cell Counting Kit-8(CCK-8)實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)和Transwell小室實(shí)驗(yàn)，檢測(cè)rhOPN對(duì)HEC-1A細(xì)胞的增殖能力、遷移能力和侵襲

4、能力的影響。(2) Westen-blot和明膠酶譜實(shí)驗(yàn)檢測(cè)不同濃度的rhOPN對(duì)HEC-1A細(xì)胞MMP-2蛋白表達(dá)及其活性的影響。選用濃度為300ng/ml的rhOPN與HEC-1A細(xì)胞共培養(yǎng)，分別在不同的時(shí)間(0h、4h、8h、12h、24h、48h)，以Westen-blot和明膠酶譜實(shí)驗(yàn)檢測(cè)rhOPN對(duì)HEC-1A細(xì)胞中MMP-2蛋白表達(dá)及其活性的影響。(3)選用濃度為300ng/ml的rhOPN與HEC-1A細(xì)胞共培養(yǎng)24h，

5、Western-blot和免疫熒光檢測(cè)rhOPN對(duì)HEC-1A細(xì)胞相應(yīng)通路分子E-cadherin、N-cadherin和Vimentin蛋白表達(dá)量及定位的影響。(4)采用不同濃度的rhOPN處理細(xì)胞24h，Western-blot檢測(cè)在不同濃度下rhOPN對(duì)HEC-1A細(xì)胞相關(guān)信號(hào)通路分子ERK和AKT的表達(dá)影響。然后加入相關(guān)信號(hào)通路分子的特異性抑制劑U0126(MEK1/2抑制劑)、LY294002（PI3K抑制劑）分別抑制HEC-

6、1A細(xì)胞ERK和AKT的活化，Westen-blot檢測(cè)MMP-2、E-cadherin、N-cadherin和Vimentin蛋白表達(dá)水平的變化。
　　結(jié)果:(0)CCK-8實(shí)驗(yàn)、劃痕實(shí)驗(yàn)、Transwell小室結(jié)果顯示:在rhOPN為300ng/ml時(shí)，HEC-1A細(xì)胞的增殖能力、遷移能力和侵襲能力最強(qiáng)。(2)隨著rhOPN濃度的增加，HEC-1A細(xì)胞MMP-2蛋白表達(dá)量逐漸上升，在rhOPN為300ng/ml處理細(xì)胞24h時(shí)

7、，MMP-2的蛋白表達(dá)量最高。明膠酶譜實(shí)驗(yàn)顯示:rhOPN為300ng/ml處理細(xì)胞24h時(shí)，MMP-2活性最強(qiáng)。(3)選取rhOPN的最佳作用條件，Westen-blot結(jié)果顯示:N-cadherin、Vimentin表達(dá)最強(qiáng)，E-cadherin表達(dá)最弱。免疫熒光結(jié)果與空白組相比:E-cadherin、N-cadherin和Vimentin均定位在細(xì)胞膜上。(4)Westen-blot結(jié)果表明:不同濃度的rhOPN蛋白刺激細(xì)胞后，H

8、EC-1A細(xì)胞相關(guān)信號(hào)通路分子ERK和AKT的活化均增強(qiáng)，分別加入以上兩種信號(hào)通路分子的抑制劑，ERK1/2、AKT的活性均會(huì)受到抑制，rhOPN蛋白對(duì)HEC-1A細(xì)胞MMP-2、N-cadherin和Vimentin的表達(dá)上調(diào)作用受到不同程度的抑制，對(duì)E-cadherin的表達(dá)下調(diào)作用也受到抑制。同時(shí)明膠酶譜實(shí)驗(yàn)顯示:MMP-2的活性均受到了不同程度的抑制。
　　結(jié)論:(1)OPN可提高HEC-1A細(xì)胞的增殖能力、遷移能力和侵襲