MPN-PCR法檢測雞肉中空腸彎曲桿菌和產(chǎn)氣莢膜梭菌.pdf

1、隨著人類生活水平的不斷提高，禽類產(chǎn)品在人類食物中所占的比重日益加大，然而空腸彎曲桿菌和產(chǎn)氣莢膜梭菌等人畜共患病原菌可污染禽類產(chǎn)品，引起人類細菌性疾病，且其發(fā)生呈逐漸增長趨勢。空腸彎曲桿菌和產(chǎn)氣莢膜梭菌不僅嚴重影響?zhàn)B禽業(yè)的發(fā)展，造成經(jīng)濟損失，同時也是造成人類胃腸炎等疾病的主要病原菌，嚴重威脅人類健康。目前，對食品中食源性致病菌定量檢測的方法主要為活菌平板計數(shù)，耗時費力，很難計算準確的數(shù)量；MPN法（最大可能數(shù)）需要進行生化鑒定，同樣操作繁

2、瑣，耗時費力；而(Real-time)PCR檢測則無法判斷樣品中的細菌是否為活菌。因此，研究旨在建立針對空腸彎曲桿菌和產(chǎn)氣莢膜梭菌的MPN-PCR檢測方法，并初步應(yīng)用于雞肉制品中這兩種病原菌的快速定量檢測。
　　首先，通過查閱相關(guān)文獻，根據(jù)空腸彎曲桿菌特有的馬尿酸酶hipO基因和產(chǎn)氣莢膜梭菌各基因型均編碼的cpa基因設(shè)計特異性引物，將PCR技術(shù)與MPN法相結(jié)合，建立了MPN-PCR快速定量檢測方法，用于定量檢測雞肉制品中的空腸彎曲

3、桿菌和產(chǎn)氣莢膜梭菌。MPN-PCR方法的整個檢測過程包括：樣品處理、增菌培養(yǎng)、模板制備、PCR擴增，實現(xiàn)了對食品中病原菌的快速定量檢測。用PCR技術(shù)替代了生化試驗，不僅可以進行定量檢測，還可以避免了由于細菌進入VBNC（活的但非可培養(yǎng)）狀態(tài)所造成的漏檢，并且檢測時間至少縮短了兩天以上。
　　其次，應(yīng)用建立的MPN-PCR定量檢測方法，對采集的186份雞肉樣品進行實際應(yīng)用，其中鮮雞肉66份，凍雞肉120份。結(jié)果：空腸彎曲桿菌的陽性檢

4、出率為17.2％，鮮雞肉的陽性檢出率為28.79%，凍雞肉的陽性檢出率為10.83%，含菌量范圍在3.6-92 MPN/g；產(chǎn)氣莢膜梭菌的陽性檢出率為15.59%，鮮雞肉的陽性檢出率為13.64%，凍雞肉的陽性檢出率為16.67%，含菌量范圍在3.6-360 MPN/g。
　　綜上所述，試驗建立的空腸彎曲桿菌和產(chǎn)氣莢膜梭菌MPN-PCR檢測方法，具有特異性強、敏感性高、相對快速、高效等特點，能為養(yǎng)禽業(yè)中疾病的防控和禽肉類加工銷售過