雞源產(chǎn)氣莢膜梭菌多重PCR鑒定和藥敏實驗.pdf

1、產(chǎn)氣莢膜梭菌（Clostridium perfringens）是革蘭氏陽性厭氧桿菌，普遍存在于環(huán)境以及人和動物胃腸道中，是人和動物胃腸道正常菌群，同時也是多種重要疾病的病原。產(chǎn)氣莢膜梭菌能夠產(chǎn)生至少17種外毒素和酶，這些毒素和酶與產(chǎn)氣莢膜梭菌引起的各種疾病密切相關，可根據(jù)其中4種主要毒素的產(chǎn)生及基因攜帶狀況將C. perfringens分為5個毒素型（A(α)、B(α、β、ε)、C(α、β)、D(α、ε)和E(α、ι)）。
　　產(chǎn)

2、氣莢膜梭菌的毒素基因和抗藥基因可隨著質粒的轉移，在同種細菌或不同種細菌之間穿梭，擴散細菌的毒素基因和抗藥性基因。實驗中比較分析3種不同的產(chǎn)氣莢膜梭菌的質粒提取方法，并通過方法改進獲得了有效的質粒提取方法，為進一步研究質粒抗藥性基因奠定基礎。
　　為了解一些地區(qū)產(chǎn)氣莢膜梭菌的毒素型分布情況及其抗藥性情況，于2014年5月至2015年8月從廣東新興、開平、廣西桂林、武鳴、玉林、云南石林，陸良、安寧地區(qū)，甘肅景泰，海南文昌、瓊海地區(qū)共5

3、省11個區(qū)縣的養(yǎng)雞場采集樣品704個，分離產(chǎn)氣莢膜梭菌菌株199株，分離率為28.5％，其中 A型187株，C型12株。檢測到 NetB毒素基因陽性菌株6株，β2毒素基因陽性菌株54株。
　　實驗選取11種獸醫(yī)常用抗生素進行產(chǎn)氣莢膜梭菌的藥物敏感性檢測，根據(jù)MIC值判斷產(chǎn)氣莢膜梭菌對這些藥物的敏感性，分析不同地區(qū)細菌的抗藥譜以及抗藥性程度。
　　C. perfringens質粒的提取實驗根據(jù) Mahony.et al（198

4、6）， Roberts.et al（1986）以及Hussain.et al（1993）的產(chǎn)氣莢膜梭菌質粒提取方法進行質粒提取方法的優(yōu)化，結果顯示Mahony.et al（1986）的方法提取質粒效果不理想，幾乎檢測不到結果。Roberts（1986）的方法雜質較少但是質粒濃度很低，因此我們在Roberts（1986）方法的基礎上同時吸取了Hussain.et al（1993）的質粒提取經(jīng)驗對實驗方法進行改進，取得了較好的結果。提取結果