產低溫脂肪酶菌株發(fā)酵條件優(yōu)化及酶學性質的初步研究.pdf

1、實驗從邯鄲含油土壤中采集樣品，經過初篩，分離出多株產脂肪酶的菌株，再進行復篩，其中5株酶活較高，測定其最適反應溫度和0℃的酶活，選出1株菌株，最適反應溫度為30℃，且0℃時的酶活最高，確定該菌株產低溫脂肪酶，并命名為HEBUST LIP-L。再對該菌株進行形態(tài)學和部分生理生化特征分析，將HEBUST LIP-L初步鑒定為假單胞菌(Pseudomonas sp.)。
　　對可能影響Pseudomonas sp.HEBUST LIP-

2、L產酶的7個因素即糊精、蛋白胨、KCl、橄欖油、Tween80、初始pH及接種量進行全面考察，選用Plackett-Burman、最陡爬坡實驗與響應面法相結合的實驗統(tǒng)計方法，快速而有效地篩選出3個主效因子（蛋白胨、橄欖油、Tween80），進而得到產脂肪酶的最佳組合:蛋白胨26.4 g/L、橄欖油16.95 mL/L、Tween8025.6 mL/L、糊精7.5 g/L、KCl3mmol/L、pH7.0、接種量8％，脂肪酶的產量達到46

3、.08 U/mL，比優(yōu)化前提高98％。該模型能很好的預測發(fā)酵情況，科學指導酶生產。
　　將Pseudomonas sp.HEBUST LIP-L所產粗酶液依次進行雙水相萃取體系（PEG2000濃度為15.0％，K2HPO4濃度為20.0％，pH值為7.0）、DEAE-纖維素離子交換層析和Sephadex G-100葡聚糖凝膠柱層析實驗，分離純化出達到電泳純的脂肪酶，并測定出該脂肪酶的相對分子量為35 kDa，最適反應pH值為9.5