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1、本研究是從自然界土壤中分離篩選得到一株產(chǎn)殼聚糖酶的微生物菌株,經(jīng)過(guò)紫外線照射6min和1.00mg/mL濃度的亞硝基胍(NTG)作用30min后,傳代五代,發(fā)現(xiàn)其遺傳穩(wěn)定性較高,并且該菌株產(chǎn)殼聚糖酶的能力有了很大的提高,將其命名為H1。通過(guò)對(duì)菌株H1發(fā)酵產(chǎn)酶條件進(jìn)行優(yōu)化研究,確定其最適發(fā)酵培養(yǎng)基組分為(w/v):(NH4)2SO41.00%,酵母提取物0.30%,蛋白胨0.50%,K2HPO40.070%,KH2PO40.030%,Na
2、Cl0.50%,MgSO4·7H2O0.050%,葡萄糖0.10%,粉末殼聚糖1.00%,調(diào)pH至5.00,接種量為3.0%(v/v),統(tǒng)一型號(hào)的500mL錐形瓶培養(yǎng)基裝量為100mL,150rpm,30℃搖床培養(yǎng)96h。在最適發(fā)酵條件下,培養(yǎng)96h后,菌株H1發(fā)酵液中殼聚糖酶活力可達(dá)到9U/mL。該殼聚糖酶是一種誘導(dǎo)型的胞外酶,先后采用30%-70%(NH4)2SO4分級(jí)鹽析、超濾器超濾脫鹽、Q-SepharoseFastFlow陰離
3、子交換層析、SephadexG-75凝膠過(guò)濾對(duì)菌株H1發(fā)酵液中的殼聚糖粗酶進(jìn)行分離提純,獲得了一定的殼聚糖純酶。經(jīng)過(guò)SDS-PAGE電泳,該殼聚糖酶呈單條帶,分子量約為43kD。對(duì)該酶進(jìn)行部分酶學(xué)性質(zhì)的研究表明:該殼聚糖酶的最適作用溫度為60℃,最適反應(yīng)pH為pH5.2;該殼聚糖酶活力隨著殼聚糖底物分子量的增加而增加;最適作用底物濃度為1.00%(w/v);金屬離子Mg2+,F(xiàn)e2+,Mn2+對(duì)酶活力有明顯的促進(jìn)作用,Cu2+、Zn2+
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