寡肽接頭分子生物催化合成的研究.pdf

1、本文開展了在體外用法尼基轉(zhuǎn)移酶催化人工合成的寡肽與法尼基焦磷酸(FPP)的合成研究，即合成我們需要的寡肽接頭分子。接頭分子是一個連接酵母細(xì)胞和抗體的一個橋梁，合成出的接頭分子是酵母細(xì)胞流式陣列的一個重要元件，為以后的酵母流式陣列的構(gòu)建打下基礎(chǔ)。這項研究內(nèi)容包括對需要的寡肽的合成設(shè)計、反應(yīng)體系的優(yōu)化及寡肽接頭分子的分離。在寡肽的合成設(shè)計過程中，主要考慮法尼基轉(zhuǎn)移酶對催化的底物的結(jié)構(gòu)要求、流式陣列中酵母細(xì)胞必須具備的結(jié)合抗體的能力要求(寡肽

2、需含有游離的羧基)以及在制作寡肽標(biāo)準(zhǔn)曲線中便于檢測的原則來設(shè)計。對反應(yīng)體系的優(yōu)化實驗中，主要進(jìn)行了兩部分實驗：一是單因素實驗部分，首先確定溫度、pH對法尼基轉(zhuǎn)移酶活性的影響，確定適宜的反應(yīng)溫度和反應(yīng)體系的pH;另外一部分是通過做三因素三水平正交試驗，在寡肽濃度飽和的條件下研究另一個底物 FPP濃度、加入的法尼基轉(zhuǎn)移酶的濃度、反應(yīng)時間對合成我們需要的寡肽接頭分子的量的影響，以確定最優(yōu)反應(yīng)體系。合成出寡肽接頭分子后，通過凝膠層析法除去反應(yīng)體