豬肺血管緊張素轉(zhuǎn)化酶的提取分離及其與抑制劑結(jié)合過程的熱力學(xué)初探.pdf

1、血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(Angiotensin Converting Enzyme，ACE; EC.3.4.15.1)是一種二肽羧基的糖蛋白酶，在血壓調(diào)節(jié)中有重要作用。制備高純度、高活力的ACE是深入研究ACE生化性質(zhì)、結(jié)構(gòu)功能和ACE與抑制劑結(jié)合作用的第一步。本論文從豬肺為原料分離純化得到ACE，對純化產(chǎn)物進(jìn)行酶學(xué)性質(zhì)研究，并初步研究了ACE與其抑制劑結(jié)合過程的熱力學(xué)參數(shù)。主要結(jié)果如下:
　　 以新鮮豬肺為原料，用pH8.3含有蔗糖

2、的硼酸緩沖液中進(jìn)行勻漿離心后，分別利用1.6mol·L-1和2.6mol·L-1兩種不同濃度的硫酸銨分級沉淀，得到的粗酶液進(jìn)行透析，分別比較了凝膠層析、超濾離心和離子交換-超濾離心三種方法純化透析液的效果。選擇處理量更大，純化倍數(shù)更高的離子交換-超濾離心法作為純化透析液的方法，得到經(jīng)SDS-PAGE顯示為一條帶的ACE純品。經(jīng)SDS-PAGE凝膠電泳分析，所得ACE相對分子質(zhì)量為182KDa，純化倍數(shù)357.3，比活為1.2476U·m

3、g-1，活力回收為12.28％。
　　 對ACE部分酶學(xué)性質(zhì)進(jìn)行了研究發(fā)現(xiàn)，純化的豬肺血管緊張素轉(zhuǎn)化酶在中性或偏弱堿性條件下表現(xiàn)出較高的活力，其酶活最大值的pH為8.3左右，豬肺ACE對溫度的敏感性較強(qiáng)，最適反應(yīng)溫度為40℃。研究了ACE催化不同HHL濃度對反應(yīng)速率的影響，從ACE反應(yīng)動力學(xué)曲線得到Lineweaver-Burk方程計(jì)算得到豬肺血管緊張素轉(zhuǎn)化酶Km為0.849mmol·L-1, Vmax為9.775nmol·mi