酪蛋白磷酸肽螯合亞鐵的制備及初步純化.pdf

1、以酪蛋白為原料,進行堿性蛋白酶水解制備酪蛋白磷酸肽(CPP)的條件優(yōu)化,同時對CPP螯合亞鐵的螯合條件進行優(yōu)化。DEAE-52纖維素陰離子交換層析法分離酪蛋白水解液,將分離得到的幾種峰樣品分別與Fe2+螯合,得到與Fe2+螯合率高的峰樣品。超濾法分離酪蛋白水解液,將分離得到的不同分子量段的多肽分別與Fe2+螯合,得到與Fe2+螯合率高的集中肽段區(qū)域。為進一步的純化奠定基礎(chǔ)。
　　1.響應(yīng)曲面法優(yōu)化CPP的制備
　　采用Pla

2、ckett-Burman設(shè)計法和響應(yīng)面分析法相結(jié)合,以CPP得率作為指標(biāo),進行堿性蛋白酶水解酪蛋白的條件優(yōu)化。結(jié)果表明,底物濃度、溫度和pH是影響CPP得率的主要因素。最佳水解條件為溫度55℃、底物濃度16％、pH10.8、酶底比1.5%,水解時間4.5h,在此條件下,CPP得率可達33.2mg/mL。
　　2.響應(yīng)曲面法優(yōu)化CPP螯合亞鐵的制備
　　根據(jù)單因素試驗和響應(yīng)曲面設(shè)計的中心組合試驗的結(jié)果,螯合的最優(yōu)條件為:溫度4

3、8℃、pH7.0、時間3.5h、物料比25:1,在此條件下螯合率為71.16%。
　　3.離子交換層析法分離酪蛋白水解液
　　以DEAE-52纖維素為離子交換介質(zhì),確定了緩沖溶液pH8.0和流速1.5ml/min的層析條件,在214nm處采用分步洗脫的方式,得到1個穿透峰和5個洗脫峰,分別與Fe2+螯合,得到與Fe2+螯合率高的峰為洗脫峰2。
　　4.超濾法分離酪蛋白水解液
　　將酪蛋白水解液稀釋3倍,依次用3種