微生物發(fā)酵生產(chǎn)殼聚糖及酶法降解殼聚糖研究.pdf

1、殼聚糖(Chitosan，CTS)是自然界已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的唯一的天然高分子堿性多糖，是甲殼素脫乙?；a(chǎn)物。CTS具有獨(dú)特的生理活性和良好的成膜性、保濕性、吸附性和抗菌性，具有廣泛的應(yīng)用價值。殼聚糖降解產(chǎn)物低聚殼聚糖(ChitosanOligosaccharides，COS)的水溶性大大改善，具有許多殼聚糖所不具備的獨(dú)特的生理活性和功能。本論文對如何利用真菌發(fā)酵生產(chǎn)殼聚糖，并用非專一性酶降解殼聚糖制備低聚殼聚糖進(jìn)行了研究。
　　 論文首

2、先對幾種常見真菌培養(yǎng)生產(chǎn)殼聚糖進(jìn)行了研究，確定雅致放射毛霉為發(fā)酵制備殼聚糖優(yōu)良菌種。通過單因素和響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)優(yōu)化了雅致放射毛霉液體發(fā)酵培養(yǎng)基的組成和發(fā)酵條件。研究表明：發(fā)酵培養(yǎng)基優(yōu)化后的組成為玉米漿6.8％、玉米粉4.2％、KH2PO40.2％、MgSO40.2％；優(yōu)化的發(fā)酵條件為培養(yǎng)時間48h、培養(yǎng)基初始pH7、培養(yǎng)溫度30℃、搖床轉(zhuǎn)速200r/min、接種量4％、裝液量50ml/250ml。
　　 其次，采用稀酸稀堿處理菌體提

3、取殼聚糖，對提取工藝路線和參數(shù)進(jìn)行了優(yōu)化。先用4％氫氧化鈉，固液比1:30，115℃處理4h除去菌體表面蛋白，再用4％醋酸60℃下提取3h，殼聚糖得率可達(dá)到13.48％。采用優(yōu)化后的發(fā)酵條件和提取條件，殼聚糖產(chǎn)量可達(dá)4.152g/L，脫乙酰度為90.25％，粘均分子量為2.1×105。
　　 此外，論文選用纖維素酶、果膠酶、木瓜蛋白酶和胃蛋白酶對殼聚糖進(jìn)行酶解，以酶解液中還原糖濃度為指標(biāo)，通過單因素實(shí)驗(yàn)考察這四種非專一性酶對殼聚

4、糖的酶解效果。結(jié)果表明：各酶降解殼聚糖的能力大小為：纖維素酶>胃蛋白酶>果膠酶>木瓜蛋白酶。采用正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)化纖維素酶和胃蛋白酶組成的復(fù)合酶酶解條件。結(jié)果表明：優(yōu)化后的酶解條件為pH5.5，溫度為65℃，胃蛋白酶量為3U/mg，纖維素酶量為3U/mg。在優(yōu)化后的條件下還原糖的濃度可以達(dá)4.64mmol/L，均高于單一的纖維素酶和胃蛋白酶的酶解效果。
　　 最后，對酶解產(chǎn)物進(jìn)行了SephadexG-25凝膠色譜分析和薄層層析。凝膠色