雙水相萃取果膠酶的研究.pdf

1、雙水相萃取技術(shù)是近年來發(fā)展起來的一種新型的生化分離技術(shù)，該技術(shù)具有生物相容性大，分離條件溫和，分離步驟簡單，易于放大，且不存在有機溶劑殘留等優(yōu)點。已經(jīng)廣泛用于各類酶、核酸、生長激素及各種植物中有效成分的提純。 本文首先對果膠酶活性的測定方法進行了比較研究，試驗證明，次碘酸鈉法測定果膠酶活性數(shù)值受外界影響誤差較大，故采用DNS比色法進行果膠酶活力的測定，這種方法減少了誤差，試驗數(shù)據(jù)可靠，測定到的酶活力穩(wěn)定。因此，DNS比色法是果膠

2、酶活力測定的較好方法。同時確定了果膠酶活力與稀釋倍數(shù)的關(guān)系，在試驗中，上相選取稀釋倍數(shù)在500左右，下相選取稀釋倍數(shù)在400左右。 本文研究了構(gòu)造雙水相體系的成相組分及不同操作條件對果膠酶活性的影響；不同稀釋倍數(shù)對果膠酶活力的影響；果膠酶在PEG/(NH<,4>)<,2>SO<,4>雙水相體系中的分配行為及影響果膠酶分配的因素；在PEG/(NH<,4>)<,2>SO<,4>雙水相中研究不同PEG分子量、PEG濃度、(NH<,4>

3、)<,2>SO<,4>濃度、pH、溫度等因素對果膠酶在兩相中的分配系數(shù)的影響。 試驗表明，不同稀釋倍數(shù)下的果膠酶活力不同；不同分子量的聚乙二醇(PEG)以及在雙水相成相濃度范圍內(nèi)，PEG1000對果膠酶活性影響不大，保持活力最高；在選定的濃度范圍，(NH<,4>)<,2>SO<,4>對果膠酶活性無顯著影響。在以下的試驗條件下獲得了較高的分配系數(shù)：PEG平均分子量1000，濃度27％，(NH<,4>)<,2>SO<,4>濃度19％

4、，pH為5.0，50℃，其分配系數(shù)達到12.65。 此外，對聚乙二醇相中果膠酶的反萃取進行了研究，考察不同濃度酒石酸鉀鈉對上相果膠酶分配系數(shù)的影響，試驗表明，在聚乙二醇/硫酸銨雙水相系統(tǒng)中，控制聚乙二醇的百分含量為27％，硫酸銨的百分含量為19％，酒石酸鉀鈉百分含量為20％，pH為5.0，室溫下，反萃取聚乙二醇/酒石酸鉀鈉雙水相體系的分配系數(shù)可以達到最大值，K=5.0。經(jīng)過反萃取后，果膠酶大部分集中在下相(水相)中，其分配系數(shù)為