JNK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在妊娠期糖尿病中作用的研究.pdf

1、妊娠期糖尿病（gestationaldiabetesmellitus，GDM）是一種在妊娠期首次發(fā)生或發(fā)現(xiàn)的不同程度糖代謝異常的內(nèi)分泌代謝性疾病。近幾年來GDM的發(fā)病率在全球均表現(xiàn)出逐年上升趨勢。該疾病嚴重危害母親及胎兒的健康，甚至危及圍產(chǎn)兒的生命。
　　氧化應(yīng)激（oxidativestress，OS）是指機體在遭受各種有害刺激時，活性氧簇（reactiveoxygenspecies，ROS）和活性氮自由基（reactivenit

2、rogenspecies，RNS）產(chǎn)生過多或發(fā)生代謝障礙，造成組織、細胞結(jié)構(gòu)和功能上的損壞。
　　研究表明，氧化應(yīng)激可能通過激活c-Jun氨基末端激酶（c-JunN-teminalKinase，JNK）信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路參與了糖尿病及其并發(fā)癥的發(fā)生發(fā)展。國內(nèi)外研究發(fā)現(xiàn)JNK在胰島素信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路、β細胞功能障礙、胰島素抵抗（Insulinresistance，IR）以及多種應(yīng)激反應(yīng)引起的細胞凋亡中發(fā)揮著重要的作用。然而氧化應(yīng)激和JNK的活

3、化及其下游凋亡誘導(dǎo)因子Bax與GDM發(fā)病及流產(chǎn)、早產(chǎn)、胚胎畸形等并發(fā)癥的相關(guān)性報道較少。
　　本研究通過構(gòu)建GDM孕鼠模型做為研究對象，檢測孕鼠子宮和胎盤組織中氧化應(yīng)激指標丙二醛含量（MDA）、超氧化物歧化酶活性（SOD）以及總抗氧化能力（T-AOC），并測定p-JNK以及凋亡誘導(dǎo)因子Bax蛋白在子宮和胎盤組織的表達情況，通過特異性抑制JNK活性，探討JNK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在GDM及其相關(guān)并發(fā)癥中的作用，從而更好地為臨床預(yù)防、診斷和治

4、療GDM提供理論依據(jù)和研究方向。
　　本實驗分為三部分：
　　第一部分：妊娠期糖尿病大鼠模型的構(gòu)建
　　目的：探討鏈脲佐菌素（streptozotocin，STZ）建立GDM孕鼠模型中不同給藥劑量對該模型穩(wěn)定性的影響，為研究GDM對母體和胎兒影響提供較好的實驗基礎(chǔ)。方法：將獲得的46只Sprague-Dawley孕鼠隨機分為4組，分別一次性腹腔注射STZ35mg/kg，45mg/kg，60mg/kg和等量的檸檬酸鹽緩沖

5、液。于妊娠第3，9，14，19d測空腹血糖，并觀察成模孕鼠在妊娠周期中體質(zhì)量、食量、飲水量及尿量的變化，比較孕鼠成模率、轉(zhuǎn)陰率和死亡率。孕鼠在妊娠第19d解剖，取其胰腺組織經(jīng)常規(guī)HE染色后，光鏡下觀察病理分析。結(jié)果：STZ45mg/kg組孕鼠在用藥3d后出現(xiàn)明顯的“三多一少”癥狀，其成模率最高（83.3％），轉(zhuǎn)陰率最低。STZ45mg/kg組與對照組空腹血糖值（mmol/L,21.8±3.0νs5.9±1.2）比較，有統(tǒng)計學(xué)差異（P<0

6、.05），體質(zhì)量也明顯減少，其高血糖狀態(tài)持續(xù)時間較長且最穩(wěn)定。結(jié)論：STZ45mg/kg腹腔注射給藥是建立GDM孕鼠模型的最佳劑量，具有較好的穩(wěn)定性。
　　第二部分：氧化應(yīng)激和p-JNK蛋白在GDM孕鼠子宮和胎盤組織中的表達及其與IR相關(guān)性的研究
　　目的：觀察氧化應(yīng)激和磷酸化c-jun氨基末端激酶（p-JNK）蛋白在妊娠期糖尿病孕鼠子宮和胎盤組織中的變化，探討其在GDM發(fā)病中的作用。方法：應(yīng)用比色法檢測妊娠期糖尿病大鼠（G

7、DM組，n=10只）和正常妊娠大鼠（正常妊娠組，n=10只）子宮和胎盤組織勻漿中丙二醛（MDA）水平、超氧化物岐化酶（SOD）含量以及總抗氧化能力（T-AOC）。采用免疫組化和westernblotting法檢測GDM組、JNK抑制劑SP600125（SP組）和正常妊娠組孕鼠子宮和胎盤組織中p-JNK蛋白的表達水平。同時檢測各組孕鼠空腹血糖水平（FPG）、空腹胰島素水平（FINS）和胰島素抵抗指數(shù)（HOMA-IR）。結(jié)果：(1)GDM組

8、孕鼠FPG、FINS及HOMA-IR水平均明顯高于正常妊娠組（P<0.05）。GDM組孕鼠子宮和胎盤組織內(nèi)MDA水平顯著高于正常妊娠組（P<0.05），而SOD含量和T-AOC則明顯低于正常妊娠組（P<0.05）。(2)p-JNK主要在子宮腺上皮、間質(zhì)細胞和少量平滑肌細胞的胞漿和胞核中表達以及胎盤絨毛膜層及母胎界面蛻膜細胞的胞漿和(或)胞核中表達。GDM組子宮和胎盤組織中p-JNK的表達水平明顯高于正常妊娠組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.

9、05）。JNK抑制劑SP600125干預(yù)后GDM孕鼠子宮和胎盤組織中p-JNK表達顯著減少（P<0.05）。(3)GDM組孕鼠子宮和胎盤組織中p-JNK蛋白表達水平與MDA含量呈正相關(guān)（P<0.05）；與SOD含量以及T-AOC均呈負相關(guān)（P<0.05）；而正常妊娠組則均無相關(guān)性。(4)GDM組HOMA-IR與子宮和胎盤組織中p-JNK蛋白表達水平呈正相關(guān)（P<0.05）；而SP組及正常妊娠組則均無相關(guān)性（P<0.05）。結(jié)論：GDM孕

10、鼠體內(nèi)氧化應(yīng)激程度與JNK蛋白的活化密切相關(guān)，而激活的JNK可能加劇了GDM胰島素抵抗，p-JNK表達異?？赡芘cGDM發(fā)病中有著重要的關(guān)系。
　　第三部分：GDM孕鼠子宮和胎盤組織中p-JNK導(dǎo)致細胞凋亡機制的研究
　　目的：觀察凋亡誘導(dǎo)因子Bax在妊娠期糖尿病孕鼠子宮和胎盤組織中的變化。方法：采用免疫組化和westernblotting法檢測GDM組、JNK抑制劑SP600125（SP組）和正常妊娠組孕鼠子宮和胎盤組織中B