活化肝星狀細(xì)胞對(duì)肝癌細(xì)胞遷移和侵襲能力的影響.pdf

1、肝細(xì)胞肝癌（HCC）是最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，隨著對(duì)HCC形成和進(jìn)展認(rèn)識(shí)的不斷深入，越來(lái)越多的研究者將注意力從肝癌細(xì)胞本身轉(zhuǎn)移到了腫瘤微環(huán)境中間質(zhì)細(xì)胞和肝癌細(xì)胞的相互作用。肝癌的侵襲及轉(zhuǎn)移是長(zhǎng)久以來(lái)備受關(guān)注的問(wèn)題，它是一個(gè)多步驟、多因素參與的復(fù)雜過(guò)程，其發(fā)生依賴于腫瘤細(xì)胞與基質(zhì)之間的相互作用。肝星狀細(xì)胞（HSC）作為肝癌微環(huán)境中最重要的間質(zhì)細(xì)胞，其促肝纖維化作用已得到證實(shí)。有研究顯示肝癌細(xì)胞可特異性驅(qū)動(dòng)HSC活化，并促進(jìn)其增殖。而活化的H

2、SC也能促進(jìn)肝癌細(xì)胞增殖。為了證實(shí)兩者的相互作用，本實(shí)驗(yàn)擬以人肝星狀細(xì)胞HSC-T6與人肝癌細(xì)胞SMMC-7721為研究對(duì)象，探究活化HSC條件培養(yǎng)基（CM）對(duì)培養(yǎng)肝癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響。進(jìn)一步闡明活化HSC與肝癌細(xì)胞之間的作用關(guān)系，以期為尋找肝癌治療新靶標(biāo)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：
　　1、1％血清的DMEM培養(yǎng)HSC-T6，收集第24h的HSC培養(yǎng)基上清作為條件培養(yǎng)基（conditioned medium,CM）。

3、r>　　2、用不同濃度的CM（0%,25%,50%,100%）培養(yǎng)人肝癌細(xì)胞SMMC-7721。
　　3、免疫組化檢測(cè)SMMC-7721細(xì)胞MMP-2、E-cadherin表達(dá)的改變。
　　4、MTT、平板克隆、劃痕修復(fù)、Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)觀察活化HSC對(duì)SMMC-7721細(xì)胞增殖、遷移、侵襲的影響。
　　5、血管生成擬態(tài)（vasculogenic mimicry,VM）實(shí)驗(yàn)觀察活化HSC對(duì)SMMC-7721細(xì)

4、胞血管生成擬態(tài)的影響。
　　結(jié)果：
　　1、免疫組化結(jié)果顯示：與對(duì)照組（0%CM）相比，各濃度CM實(shí)驗(yàn)組SMMC-7721細(xì)胞的MMP-2蛋白表達(dá)量增高，以50%CM組和100%CM組增高顯著（P＜0.05）；各濃度CM實(shí)驗(yàn)組SMMC-7721細(xì)胞的E-cadherin蛋白表達(dá)量降低，以50%CM組和100%CM組降低顯著（P＜0.01）。
　　2、MTT結(jié)果顯示：與對(duì)照組（0%CM）相比，不同濃度CM（25%、50%

5、、100%）均顯著促進(jìn)SMMC-7721細(xì)胞的增殖（P＜0.01）。
　　3、平板克隆形成實(shí)驗(yàn)示：與對(duì)照組（0%CM）相比，不同濃度CM（25%、50%、100%）均顯著增強(qiáng)SMMC-7721細(xì)胞的集落形成能力（P＜0.05）。
　　4、劃痕修復(fù)實(shí)驗(yàn)示：與對(duì)照組（0%CM）相比，不同濃度CM（25%、50%、100%）均顯著增強(qiáng)SMMC-7721細(xì)胞的遷移性（P＜0.05）。
　　5、Transwell細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)示：

6、與對(duì)照組（0%CM）相比，50%CM和100%CM組均顯著增強(qiáng)SMMC-7721細(xì)胞的侵襲性（P＜0.05）。
　　6、血管生成擬態(tài)實(shí)驗(yàn)示：與對(duì)照組（0%CM）相比，100%CM組明顯增強(qiáng)SMMC-7721細(xì)胞成血管擬態(tài)能力（t=6.944，P<0.001）。
　　結(jié)論：
　　活化的人肝星狀細(xì)胞HSC-T6能增強(qiáng)人肝癌細(xì)胞系SMMC-7721細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲能力。相信隨著對(duì)肝星狀細(xì)胞研究的更加深入，其會(huì)為肝癌術(shù)后